2004 Fiscal Year Annual Research Report
環境因子がC1^-ホメオスタシス変化を介して皮質神経回路の発達と再生に与える影響
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16390058
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
福田 敦夫 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50254272)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山田 順子 静岡大学, 大学院・電子科学研究科, 助手 (30334965)
井上 浩一 浜松医科大学, 医学部, 助手 (80345818)
窪田 寿彦 浜松医科大学, 医学部, 助手 (80377746)
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| Keywords | クロライドトランスポーター / 皮質板細胞 / カハールレチウス細胞 / 細胞移動 / GABA / タウリン / 国際情報交換 / ドイツ |
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| Research Abstract |
1,GAD67-GFP knock-inマウス脳へのHcRed遺伝子インビボ導入によるradial移動細胞の可視化[井上・山田・福田]:GABA細胞特異的にGFP(緑色蛍光)を発現するGAD67-GFP knock-inマウスの子宮内胎仔の脳に、赤色蛍光を発するHcRed遺伝子をインビボ電気穿孔法で導入した。その後、任意の胎齢、生後日齢で仔マウス脳の新鮮スライス標本を共焦点顕微鏡で観察し、GFP発現細胞とHcRed発現細胞をそれぞれ同定できた。すなわち、ganglionic eminenceで発生しtangential移動中のGABA細胞とradial移動中のglutamate細胞を生きた状態で識別する方法を確立した。
2,辺縁帯におけるCajal-Retzius細胞間のクロストークの解析[福田・Luhmann]:大脳皮質辺縁帯はreelinを分泌し、細胞移動による大脳皮質層構造構築に重要である。そこで、辺縁帯のtangential slice標本を作成し、電気刺激で誘発された興奮の空間伝播を膜電位イメージングで可視化した。その結果、成熟動物とは全く逆に、本来抑制性であるはずのGABA_Aやglycine受容体が辺縁帯の情報伝達においては興奮性に作用しており、内向きCl^-トランスポーター(NKCCI)によって[Cl^-]_iが高いことがこれに関与していた。また、内在性に豊富に存在するgIycineアゴニストのタウリンが辺縁帯の情報伝達を促進していた。
3.radial及びtangential移動細胞の相互作用によるCl^-ホメオスタシス関連遺伝子発現の変化[山田・福田・窪田・Luhmann]:1.で作成したモデルを用い、radial細胞移動へのtangential移動細胞からのGABAの影響を検討するためGABA含有量が異なるホモ、ヘテロと野生型でradial移動の状態を比較したが明らかな差はなかった。ついで、radial移動細胞からパッチクランプとsingle-cellRT-PCRを行い、移動過程でのGABA応答とGABA_A受容体mRNAの発現パターンへのGABAの影響を解析した。
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