2006 Fiscal Year Annual Research Report
歯周病原性細菌P・ gingivalisの自然免疫逃避機構の解析
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16390614
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
吉村 篤利 長崎大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (70253680)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
原 宜興 長崎大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 教授 (60159100)
中山 浩次 長崎大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 教授 (80150473)
内藤 真理子 長崎大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 助手 (20244072)
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| Keywords | 歯周病原性細菌 / 自然免疫 / 免疫逃避 / 蛋白分解酵素 |
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| Research Abstract |
歯周病原性細菌P.gingivalisの自然免疫からの逃避機構を検討するために、gingipain欠損株P.gingivalisからgingipainにより切断・不活化されるToll-like receptor (TLR) 2、TLR4非依存性の自然免疫活性化因子の精製、同定を試みた。
まず、P.gingivalisのrgpA rgpB kgp遺伝子変異株KDP136を嫌気条件下で培養し、対数増殖期後期に集菌した。洗浄後に低濃度の界面活性剤で菌体表層成分を遊離し、可溶化成分を抽出した。可溶化菌体表層成分をイオン交換クロマトグラフィーおよびゲル濾過クロマトグラフィーを用いて分画し、分画後のそれぞれの試料で、LPSやリポ蛋白等に非応答性のNF-κBレポーター細胞(7.19細胞)を刺激し、TLR2およびTLR4非依存性自然免疫細胞刺激活性を測定して活性画分をスクリーニングし、精製試料を得た。試料をSDS-PAGEにより解析したところ、123kDaのバンドが検出された。精製後の蛋白をマススペクトロメトリーにより解析したところ、P.gingivalis 33277株ゲノムにコードされるORF PGNO748であることが確認された。更に、P.gingivalis KDP136のORF PGNO748を、アンピシリン耐性遺伝子cepAに置き換えた変異株を作製し、7.19細胞を刺激したところ、KDP136凍結乾燥菌体は7.19細胞を活性化したのに対し、KDP136由来PGNO748欠損株凍結乾燥菌体は7.19細胞を活性化しなかった。これらの結果から、P.gingivalis gingipain欠損株の保有するgingipain感受性TLR2、TLR4非依存性自然免疫活性化因子は、ORF PGNO748によってコードされていることが示された。
現在、P.gingivalis PGNO748欠損株凍結乾燥菌体で、TLR刺激伝達経路を欠損したマウスの腹腔細胞を刺激し、PGNO748による刺激伝達経路について解析すると共に、ヒトおよびマウス白血球のP.gingivalisへの応答性におけるPGNO748の役割ついても解析を進めている。
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