2004 Fiscal Year Annual Research Report
潜在精巣罹患動物における黄体形成ホルモン受容体の遺伝子変異の解明と診断法の開発
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16580265
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| Research Institution | Osaka Prefecture University |
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Principal Investigator |
川手 憲俊 大阪府立大学, 農学生命科学研究科, 講師 (80221901)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
澤田 勉 大阪府立大学, 農学生命科学研究科, 教授 (60081600)
玉田 尋通 大阪府立大学, 農学生命科学研究科, 助教授 (10155252)
稲葉 俊夫 大阪府立大学, 農学生命科学研究科, 教授 (00137241)
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| Keywords | 潜在精巣 / イヌ / ウシ / LH受容体 / cDNA / 遺伝子変異 / 遺伝子診断 |
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| Research Abstract |
本年度はまずイヌの黄体形成ホルモン(LH)の受容体をコードする完全長cDNAのクローニングに取り組んだ。正常犬2頭(ポメラニアン1頭およびグレートデン1頭)の精巣から総RNAを抽出した。LH受容体cDNAのクローニングは全長を5つの断片に分けて実施した。ウシ、ブタ、ヒトのLH受容体のcDNA塩基配列から設計したプライマーを用いてRT-PCRを行った。5'側および3'側末端部分はそれぞれのクローニング用キットを用いて行い、中間部分は設計した上流および下流プライマーを用いて通常のRT-PCR法を行った。得られたcDNA断片は塩基配列決定用ベクターに組み込んで、大腸菌にトランスフォーメーションした。各々のcDNA断片1つにつき3個以上の大腸菌コロニー由来の塩基配列を解析した。その結果、全長2.1kbのうち、5'側および3'側末端を除く中間部分の約1.8kbのcDNAのクローニングに成功した。その塩基と推定アミノ酸の配列はポメラニアンとグレートデンの品種間でそれぞれ、99.9%および100%の相同性を示した。また、イヌ(グレートデン)とブタ、ウシおよびヒトのLH受容体cDNAを比較したところ、塩基はそれぞれ、93.2%、92.4%および90.4%を示し、アミノ酸はそれぞれ、94.4%、93.5%および89.5%を示した。現在、残りの5'側および3'側末端部分のクローニングを急いでいる。
潜在精巣罹患動物については、イヌ3頭とウシ1頭について同受容体cDNAの一部分について、塩基配列の解析に着手しており、現在までにイヌ1頭およびウシ1頭において数箇所の塩基が正常動物と比較して異なっており、現在それらの確認を急いでいる。
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Research Products
(4 results)
