免疫学的手法による生体内酸化LDLの分離とその性状解析

2004 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16590065
• Research Institution: Showa University
• Principal Investigator: 板部 洋之 昭和大学, 薬学部, 教授 (30203079)
• Keywords: LDL / 酸化LDL / モノクローナル抗体 / 動脈硬化症

Research Abstract

低比重リポタンパク質が酸化変性を受けて生じる酸化LDLは、動脈硬化の発症要因と考えられ、数多くの研究が進められてきた。抗酸化PCモノクローナル抗体(DLH3)を用いた酸化LDL高感度測定系の開発を通して、これまでにヒト血漿中に酸化LDLが実在することを示してきた。
しかし、酸化LDLは多様な修飾を受けた不均一な粒子の集合であり、生体内の酸化LDLがどのような性状であるのか、明らかにされていない。本研究では、血漿中に既に存在する生体内酸化LDL上のapoBタンパク質および脂質に対する変性の特徴を明らかにする。その結果から、生体内でのLDL酸化変性の機序、酸化LDLの生体内代謝、そして血漿酸化LDL値変動の意義を解明することを目的とする。
酸化LDL粒子に結合するモノクローナル抗体DLH3は、酸化LDL上の酸化PCを認識する。DLH3抗体と抗マウスIgM抗体標識磁気ビーズを用いた免疫沈降法で、ヒト血漿中から微量の酸化LDLの分離を試みた。DLH3抗体および抗apoB抗体で免疫ブロットし、免疫沈降物を調べたところ、DLH3抗体なしの対照に比べて、DLH3抗体陽性のバンドがわずかに検出された。しかし、抗apoB抗体では無数の混入タンパク(断片)と思われるバンドが見られ、免疫沈降による十分な濃縮はまだできていないと思われた。このように、血漿中の酸化LDLを分離できる可能性がいくらかでも見えてきたが、分離・解析方法の条件は、いくつかの検討がまだ必要と思われた。現在、免疫沈降時の諸条件(温度、時間、抗体量、ブロッキング剤etc)を検討するとともに、酸化LDL吸着性メンブレンの活用も考慮中である。

Research Products

• [Journal Article] Bilirubin from heme oxygenase-1 attenuates vascular endothelial activation and dysfunction against pro-inflammatory stresses. (2005)
  • Author(s): Kawamura, K., Ishikawa, K., Wada, Y., Matsumoto, H., Itabe, H., Kodama, T., Maruyama, Y.
  • Journal Title: Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol. 25 Pages: 155-160
• [Journal Article] Role of macrophage and smooth muscle cell apoptosis in association with oxidized low-density lipoprotein in the atherosclerotic development. (2005)
  • Author(s): Akishima Y, Akasaka Y, Ishikawa Y, Lijun Z, Kiguchi H, Ito K, Itabe H, Ishii T.
  • Journal Title: Mod.Pathol. (印刷中)
• [Journal Article] Localization of oxidized phosphatidylcholine in macrophages in idiopathic pulmonary fibrosis. (2005)
  • Author(s): Yoshimi, N., Ikura, Y., Sugama, Y., Ohsawa, M., Hai, E., Kayo, S., Itabe, H., et al.
  • Journal Title: Lung (印刷中)
• [Journal Article] HDL-C levels modify the association between plasma levels of oxidatively modified LDL and coronary artery disease in men. (2004)
  • Author(s): Zhang, B., Bai, H., Liu, R., Itabe, H., Takano, T., Saku, K.
  • Journal Title: Metabolism 53 Pages: 423-429
• [Journal Article] Identification of the major proteins in the lipid droplet-enriched fraction isolated from the human hepatocyte cell line HuH7. (2004)
  • Author(s): Fujimoto, Y., Itabe, H., Sakai, J., Makita, M., et al.
  • Journal Title: Biochim.Biophys.Acta 1644 Pages: 47-59
• [Journal Article] Basement membrane-type heparan sulfate proteoglycan (perlecan) and low-density lipoprotein (LDL) co-localized in granulation tissues : a possible pathogenesis of cholesterol granulomas in jaw cysts. (2004)
  • Author(s): Yamazaki, M., Cheng, J., Hao, N., Takagi, R., Jimi, S., Itabe, H., Saku, T.
  • Journal Title: Oral Pathol.Med. 33 Pages: 177-184
• [Journal Article] Oxidized phospholipids in oxidized low-density lipoprotein reduce the activity of tissue factor pathway inhibitor through association with its carboxy-terminal region. (2004)
  • Author(s): Ohkura.N., Hiraishi, S., Itabe, H., et al.
  • Journal Title: Antioxidants and Redox Signaling 6 Pages: 705-712
• [Journal Article] Oxidized low density lipoprotein levels circulating in plasma and deposited in the tissues : Comparison between Helicobacter pylori associated gastritis and acute myocardial infarction (2004)
  • Author(s): Kayo, S., Ohsawa, M., Ehara, S., Naruko, T., Ikura, Y., Hai, E., Yoshimi, N., Itabe, H., et al.
  • Journal Title: American Heart Journal 148 Pages: 818-825
• [Journal Article] 生体内酸化LDL生成、動態と血管 (2004)
  • Author(s): 板部 洋之
  • Journal Title: 血管医学 5 Pages: 439-446
• [Journal Article] Measurement of oxidized LDL present in human plasma and atherosclerotic lesions. (2004)
  • Author(s): Itabe, H., Ueda, M., Uno, M., Takano, T
  • Journal Title: International Congress Series 1262 Pages: 87-90