免疫学的手法による生体内酸化LDLの分離とその性状解析

2005 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16590065
• Research Institution: Showa University
• Principal Investigator: 板部 洋之 昭和大学, 薬学部, 教授 (30203079)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 加藤 里奈 昭和大学, 薬学部, 助手 (30392400) ; 小浜 孝士 昭和大学, 薬学部, 助手 (60395647)
• Keywords: 酸化LDL / 動脈硬化症 / モノクローナル抗体 / アポEノックアウトマウス / 質量分析 / 酸化ストレス

Research Abstract

我々は、抗酸化PCモノクローナル抗体(DLH3)を用いた酸化LDL高感度測定系の開発を通して、ヒト血漿中に酸化LDLの実在を示してきた。動脈硬化の発症要因である酸化LDLは、酸化LDLは多様な修飾を受けた不均一な粒子の集合であり、生体内の酸化LDLの具体的な性状ではいまだ明らかにされていない。本研究では、ヒト血漿から生体内酸化LDLを単離し、そのapoBタンパク質および脂質に対する変性構造を明らかにすることで、生体内でのLDLの酸化変性機序、生成した酸化LDLの代謝動態、そして血漿酸化LDL値の臨床的な意義を、より明確化することを目的とする。
DLH3抗体を用いた測定形に基づく推定で、血漿中の酸化LDLはLDL中の1/10000程度と極めて微量である。そこで、修飾タンパク構造を高感度で分析可能なESI-LC/MS/MS法を導入することにした。アクロレイン及び4-ヒドロキシノネナール(HNE)で修飾したヒトLDLを、トリプシン消化し質量分析装置にかけたところ、アクロレイン修飾リシン残基、HNE修飾ヒスチジン残基を含むapoB由来修飾ププチドの検出および同定に成功した。これら代表的な酸化的修飾部分は、酸化変性の良いマーカーとなり、生体内酸化LDLの分析を進める上で非常に有用である。また、酸化LDL中の酸化リン脂質や酸化ステロールのMSでの検出にも成功した。血漿酸化LDLの分析には、DLH3抗体、あるいは酸化LDL吸着性膜を用いて血漿中の酸化LDLの濃縮・分離が必要である。本年度、予備的な検討では血漿中の酸化LDL分離に成功したが、さらにスケールアップと回収条件の改良を目指している。またヒト血漿に加え、動脈硬化モデルであるapoEノックアウトマウスの血漿や動脈硬化巣から酸化LDLを分離・解析し、さらにヒト循環器疾患患者の血漿中の酸化LDLについても検討可能な系にしたいと考えている。

Research Products

• [Journal Article] ADRP/adipophilin is degraded through the proteasome-dependent pathway during regression of lipid-storing cells. (2006)
  • Author(s): Masuda, Y., Itabe, H., Odaki, M., Hama, K., Fujimoto, Y., Mori, M, Sasabe, N., Aoki, J., Arai, H., Takano, T.
  • Journal Title: Journal of Lipid Research 48 Pages: 87-98
• [Journal Article] Expression of lectin-like oxidized LDL receptor-1 in smooth muscle cells after vascular injury. (2006)
  • Author(s): Eto, H., Miyata, M., Kume, N., Minami, M., Itabe, H., Orihara, K., Hamasaki, S., Biro, S., Otsuji, Y., Kita, T., Tei, C.
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun. 241 Pages: 591-598
• [Journal Article] Role of macrophage and smooth muscle cell apoptosis in association with oxidized low-density lipoprotein in the atherosclerotic development. (2005)
  • Author(s): Akishima Y, Akasaka Y, Ishikawa Y, Lijun Z, Kiguchi H, Ito K, Itabe H, Ishii T
  • Journal Title: Modern Pathology 18 Pages: 365-373
• [Journal Article] Oxidized phosphatidylcholine in alveolar macrophages in idiopathic interstitial pneumonias (2005)
  • Author(s): Yoshimi, N., Ikura, Y., Sugama, Y., Ohsawa, M., Hai, E., Kayo, S., Shirai, N., Yamamoto, S., Inoue, Y., Itabe, H., Yoshikawa, J., Ueda, M
  • Journal Title: Lung 183 Pages: 109-121
• [Journal Article] A Redox-Sensitive Pathway is Involved in Oxidized LDL- Induced Downregulation of Insulin-like Growth Factor-1 Receptor. (2005)
  • Author(s): Higashi, Y., Pen, T., Du, J., Suhkanov, S., Li, Y., Itabe, H., Parthasarathy, S., Delafontaine, P.
  • Journal Title: Journal of Lipid Research 46 Pages: 1266-1277
• [Journal Article] Inhibition of brain damage by edaravone, a free radical scavenger, can be monitored by plasma biomarkers that detect oxidative and astrocyte damage in patients with acute cerebral infarction. (2005)
  • Author(s): Uno, M., Kitazato, K.T., Suzue, A., Matsuzaki, K., Harada, M., Itabe, H., Nagahiro, S.
  • Journal Title: Free Radical Biology and Medicine 39 Pages: 1109-1116
• [Journal Article] Contribution of an imbalance between oxidant-antioxidant systems to plaque vulnerability in patients with carotid artery stenosis. (2005)
  • Author(s): Uno, M., Kitazato, K.T., Suzue, A., Itabe, H., Hao, L., Nagahiro, S.
  • Journal Title: Journal of Neurosurgery 103 Pages: 518-525
• [Book] 酸化ストレスマーカー (2005)
  • Author(s): 板部洋之
  • Total Pages: 296
  • Publisher: 学会出版センター
  • Description: 「研究成果報告書概要(和文)」より