2004 Fiscal Year Annual Research Report
高機能性siRNAキャリアとしてのデンドリマー/シクロデキストリン結合体の構築
| Project/Area Number |
16590114
|
|---|
| Research Institution | Kumamoto University |
|---|
Principal Investigator |
有馬 英俊 熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 助教授 (50260964)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
甲斐 広文 熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 教授 (30194658)
平山 文俊 熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 助教授 (90094036)
上釜 兼人 熊本大学, 大学院・医学薬学研究部, 教授 (90040328)
|
|---|
| Keywords | シクロデキストリン / デンドリマー / 結合体 / siRNA / RNAi効果 |
|---|
| Research Abstract |
各種シクロデキストリン/デンドリマー結合体(CDE)結合体の中で遺伝子発現効果に優れるα-CDE結合体(G3,2.4)およびその結合体中のデンドリマー分子にガラクトース分子を結合させたGalCDE結合体、さらにはGalCDE結合体中のガラクトース分子とデンドリマーとの間に2分子のカプロン酸分子をスペーサーとした導入し、アシアロ糖蛋白レセプター(AGPR)に対して高親和性を有するGalcap2CDE結合体を新規に合成し、その構造をNMRなどにて確認した。次に、siRNA研究領域において汎用されているルシフェラーゼを発現するpGL3 control vectorとpGL3 siRNAをコトランスフェクション後のルシフェラーゼ活性を指標にRNAi効果に対する各種CDE結合体および市販の遺伝子・siRNA導入試薬(Lipofectamine2000,RNAiFect, TransFast, Lipofection)の影響を比較検討した結果、α-CDE結合体はこれら市販導入試薬に比べて、塩基配列特異的なRNAi効果を示し、かつその効果は非常にバラツキが小さく、高い再現性を示すことを明らかにした。また、α-CDE結合体/siRNA/pDNA複合体の細胞障害性は市販の導入試薬系に比べて非常に小さかった。さらに、ヘアピン型siRNA発現ベクターの遺伝子発現抑制効果に対するα-CDE結合体の影響を検討した結果、siRNAの場合と同様に優れたRNAi効果を示すことを明らかにした。今後、内因性遺伝子発現に及ぼすRNAi効果の確認ならびにin vivoにおける効果について検討する。
|
