2004 Fiscal Year Annual Research Report
新規Na^+駆動性カチオントランスポーターの同定とその機能的・病態的役割の解明
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16590213
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| Research Institution | Fukuoka University |
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Principal Investigator |
岩本 隆宏 福岡大学, 医学部, 講師 (20300973)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
右田 啓介 福岡大学, 医学部, 助手 (10352262)
荒井 勇二 国立循環器病センター研究所, バイオサイエンス部, 室長 (30202724)
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| Keywords | Na^+ / Ca^<2+>交換輸送体 / カチオントランスポーター / 発現系 / トランスジェニックマウス / 臓器分布 |
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| Research Abstract |
本研究では、Na^+代謝異常が引き起こす病態機序(高血圧、動脈硬化、虚血性疾患、糖尿病、腎疾患)にかかわる新規なNa^+駆動性カチオントランスポーターの同定を目指す。今回、Na^+/Ca^<2+>交換輸送体(NCX)スーパーファミリーに共通の特徴的リピート構造(α領域)に注目し、この特殊配列を用いた遺伝子検索から、新規な候補遺伝子(AおよびB)を単離することに成功した。まず、これらの候補遺伝子が新規なNa^+駆動性カチオントランスポーターであることを証明するため、候補遺伝子を発現ベクターに挿入し、高発現細胞を作製した。現在、この発現細胞を用いて、カチオン輸送のNa^+依存性をアイソトープを用いて解析中である。また、アフリカツメガエル卵母細胞への発現系を構築中であり、この発現系が完成すれば電気生理学的な機能解析を行う予定である。さらに、これら候補遺伝子の臓器および細胞内局在を調べるため、抗原蛋白を作製しウサギに免疫することにより、特異抗体を作製した。候補遺伝子Aの臓器分布をwestern blotで調べたところ、全ての臓器に普遍的に存在するものの、その発現は筋細胞で高いことが分かった。そこで、候補遺伝子Aについて、心筋細胞および平滑筋細胞での機能的役割を生体レベルで解析する目的で、心筋特異的なプロモーターおよび平滑筋特異的なプロモーターを用いたトランスジェニックマウスの作製に取り掛かった。現在、血管平滑筋特異的な候補遺伝子Aのトランスジェニックマウスをライン化している段階である。以上、本年度は、新規Na^+駆動性カチオントランスポーターの候補遺伝子を単離し(2種)、それらの機能解析へ向けての実験材料の調製を行った。
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