EBウイルス核蛋白EBNA3AのBリンパ球不死化における役割

2004 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16590380
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 丸尾 聖爾 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助教授 (70292018)
• Keywords: EBウイルス / Bリンパ球不死化 / EBNA3A / RBP-Jκ

Research Abstract

Epstein-Barrウイルス(EBウイルス)は正常Bリンパ球をLCLと呼ばれる不死化細胞に変換する。ウイルスの核蛋白質EBNA3AはBリンパ球不死化に必須であることが明らかになっている。Bリンパ球不死化におけるEBNA3Aの作用機序を明らかにするため、EBNA3Aをオン・オフできる組換えEBウイルスを作製し、このウイルスを用いてBリンパ球を不死化してLCLを作製した。このコンディショナルEBNA3A LCLはEBNA3Aオンの状態では増殖したが、EBNA3AをオフにするとLCLの増殖は停止した。
EBNA3AはDNA結合蛋白質RBP-Jκと結合することが知られている。様々なEBNA3Aの欠失変異体を作製し、免疫沈降法を用いて解析を行うことにより、EBNA3Aのアミノ酸170〜240の領域がRBP-Jκとの結合に必須であることを明らかにした。また、EBNA3AはウイルスのCpプロモーターの活性をRBP-Jκ依存的に抑制することも知られている。レポーターアッセイを用いた解析から、Cpプロモーター抑制にはEBNA3Aのアミノ酸170〜240、および300〜386の2つの領域が重要であることも明らかにした。
コンディショナルEBNA3A LCLとEBNA3A変異体を用いた相補アッセイを行うことにより、LCLの増殖に必須のEBNA3Aのアミノ酸領域を決定した。RBP-Jκとの結合に必須の領域(アミノ酸170〜240)、RBP-Jκ依存的Cpプロモーター活性の抑制に必須の領域(アミノ酸300〜386)はどちらもLCLの増殖に必要であった。
以上の結果から、EBNA3AはDNA結合蛋白質RBP-Jκと結合して転写調節因子として機能することによりLCLの増殖に寄与することが明らかになった。