糖鎖を標的とした肝癌遺伝子治療戦略

2006 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16590582
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 青柳 豊 新潟大学, 医歯学系, 教授 (00142266)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小谷 昌司 新潟大学, 自然科学系, 教授 (60018702) ; 大越 章吾 新潟大学, 医歯学総合病院, 講師 (70231199) ; 五十嵐 正人 新潟大学, 医歯学総合病院, 医員 (00401745)
• Keywords: 肝細胞癌 / 糖鎖 / 遺伝子治療 / 糖鎖転移酵素

Research Abstract

今年度はAFT(Fut8)に対する持続的shRNA発現細胞株の樹立を試みたが,ターゲット配列を発現するpSUPER.AFTが導入された安定細胞系列を樹立することが困難であった.その原因を明らかとする目的で,AFT以外のメッセージを対象として,B型肝炎ウイルスHBx領域を対象として上述と同様のステップを踏み,pSUPER.HBxを含めた持続安定発現細胞系列が樹立可能であった.次にHBx発現トランスジェニックマウスの尾静脈よりHydrodynamic gene delivery法による肝細胞へのプラスミドの導入を行い,pSUPER.HBxによる特異的なHBxの著明な発現抑制が確認された.次に,アンチセンスオリゴRNAによるAFTメッセージのノックダウンを試みた.その結果,アンチセンス群がFuGENE6群に比較して有意に低値をとっていた以外,他の群間に有意な差異は認められなかった.以上より,AFT活性の抑制自体が細胞の生存を不可能とするものではないことが示唆された.さらに,オフターゲット効果の検討についても行った.RNAiは特異性の高い現象であると考えられてきたが,ターゲットの配列以外の,オフターゲット効果,が報告されている.そこで,今回我々が用いたAFTに対するshRNAのターゲット配列である5'-GTGGTCGAGCTTCCCATTG-3'に関して,siRNA Seed Locatorプログラムを用い,ターゲット以外に抑制効果が生じている可能性が高いとされる遺伝子を検索し,1398もの遺伝子がオフターゲット効果を受ける候補遺伝子として抽出された.今回の検討で我々は,初期の目的である持続的shRNA発現によるAFT遺伝子ノックダウン細胞の樹立と,AFTノックダウンに伴う各種糖蛋白糖鎖の変化をプロファイリングすることを果たせなかった.持続的なAFTノックダウン細胞が樹立できなかった最大の原因は,我々が選択したAFTのターゲット配列に基づくオフターゲット効果によることが示唆された.

Research Products

• [Journal Article] Long-term culture of postnatal mouse hepatic stem/progenitor cells and their relative developmental hierarchy. (2007)
  • Author(s): Tsuchiya A, Heike T, Baba S, Fujino H, Umeda K, Matsuda Y, Nomoto M, Ichida T, Aoyagi Y, Nakahata T.
  • Journal Title: Stem Cells. 25 Pages: 895-902
• [Journal Article] An inhibitor of c-Jun NH2-terminal kinase, SP600125, protects mice from D-galactosamine/lipopolysaccharide-induced hepatic failure by modulating BH3-only proteins. (2007)
  • Author(s): Takamura M, Matsuda Y, Yamagiwa S, Tamura Y, Honda Y, Suzuki K, Ichida T, Aoyagi Y.
  • Journal Title: Life Sci. 80・14 Pages: 1335-44
• [Journal Article] Decompensated lamivudine-resistant Hepatitis B virus related cirrhosis treated successfully with adefovir dipivoxil allowin surgery for hepatocellular carcinoma. (2007)
  • Author(s): Takamura M, Ichida T, Ohkoshi S, Tsubata S, Osaki A, Aoyagi T, Nomoto M, Uehara K, Terada H, Aoyagi Y.
  • Journal Title: Intern Med. 46・7 Pages: 367-371
• [Journal Article] Mtf-1 lymphoma-susceptibility locus affects retention of large thymocytes with high ROS levels in mice after gamma-irradiation. (2007)
  • Author(s): Maruyama M, Yamamoto T, Kohara Y, Katsuragi Y, Mishima Y, Aoyagi Y, Kominami R.
  • Journal Title: Biochem Biopliys Res Commun. 354 Pages: 209-15
• [Journal Article] Collagenous gastritis : A case report and endoscopic and pathologic evaluation of the nodularity of Gastric Mucosa. (2007)
  • Author(s): Kamimura K, Kobayashi M, Narisawa R, Watanabe H, Sato Y, Honma T, Sekine A, Aoyagi Y.
  • Journal Title: Dig. Dis. Sci. 52・4 Pages: 995-1000
• [Journal Article] Lack of Bcl11b tumor suppressor results in vulnerability to DNA replication stress and damages. (2007)
  • Author(s): Kamimura K, Mishima Y, Obata M, Endo T, Aoyagi Y, Kominami R.
  • Journal Title: Oncogene (印刷中)
• [Journal Article] Altered expression of TLR homolog RP105 on monocytes hypersensitive to LPS in patients with primary biliary cirrhosis (2007)
  • Author(s): Honda Y, Yamagiwa S, Matsuda Y, Takamura M, Ichida T, Aoyagi Y.
  • Journal Title: J Hepatol. (印刷中)
• [Journal Article] Comprehensive Analysis of the Effects of Ordinary Nutrients on Hepatitis C Virus RNA Replication in Cell Culture, (2007)
  • Author(s): Yano M, Ikeda M, Abe KI, Dansako H, Ohkoshi S, Aoyagi Y, Kato N.
  • Journal Title: Antimicrobial Agents and Chemotherapy (印刷中)
• [Journal Article] Haploinsufficiency of Bcl11b for suppression of lymphomagenesis and thymocyte development. (2007)
  • Author(s): Kamimura K, Ohi H, Kubota T, Okazuka K, Yoshikai Y, Wakabayashi Y, Aoyagi Y, Mishima Y, Kominami R.
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun. 355・2 Pages: 538-42
• [Journal Article] A primary follicular lymphoma of the duodenum treated successfully with radiation therapy. (2006)
  • Author(s): Takamura M, Narisawa R, Maruyama Y, Yokoyama J, Fukuhara Y, Kawai H, Yamagiwa S, Sato Y, Matsuda Y, Sugimura K, Ichida T, Aoyagi Y.
  • Journal Title: Intern Med. 45・5 Pages: 309-11
• [Journal Article] Long-term outcomes of hepatectomy vs percutaneous ablation for treatment of hepatocellular carcinoma <or=4 cm. (2006)
  • Author(s): Wakai T, Shirai Y, Suda T, Yokoyama N, Sakata J, Cruz PV, Kawai H, Matsuda Y, Watanabe M, Aoyagi Y, Hatakeyama K.
  • Journal Title: World J Gastroenterol. 28・12 Pages: 546-52
• [Journal Article] Common clinicopathological features of the patients with chronic hepatitis B virus infection who developed hepatocellular carcinoma after seroconversion to anti-HBs--a consideration of the pathogenesis of HBV-induced hepatocellular carcinoma and a strategy to inhibit it. (2006)
  • Author(s): Tsuboi Y, Ohkoshi S, Yano M, Suzuki K, Tsubata SS, Ishihara K, Ichida T, Sugitani S, Shibazaki K, Aoyagi Y.
  • Journal Title: Hepato-Gasroenterology 53・67 Pages: 110-4
• [Journal Article] Role of IP-1 0/CXCL10 in the progression of pancreatitis-like injury in mice after murine retroviral infection. (2006)
  • Author(s): Kawauchi Y, Suzuki K, Watanabe S, Yamagiwa S, Yoneyama H, Han GD, Palaniyandi SS, Veeraveedu PT, Watanabe K, Kawachi H, Okada Y, Shimizu F, Asakura H, Aoyagi Y, Narumi S.
  • Journal Title: Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 291・2 Pages: G345-54
• [Journal Article] Absence of pretreatment markers that predict the emergence of YMDD mutants during lamivudine treatment-the results of a prospective multi-center study. (2006)
  • Author(s): Yano M, Ohkoshi S, Suzuki K, Ito S, Wakabayashi H, Sugiyama M, Watanabe T, Maeda H, Hatakeyama SA, Hatano T, Kobayashi Y, Takei S, Kohjiro H, Tsuboi Y, Takahashi T, Ishikawa T, Kamimura T, Ichida T, Aoyagi Y.
  • Journal Title: Hepato-Gasroenterology 53・67 Pages: 124-7
• [Journal Article] MEK/ERK signaling is a critical mediator for integrin-induced cell scattering in highly metastatic hepatocellular carcinoma cells. (2006)
  • Author(s): Honma N, Genda T, Matsuda Y, Yamagiwa S, Takamura M, Ichida T, Aoyagi Y.
  • Journal Title: Lab Invest. 86・7 Pages: 687-96
• [Journal Article] Attenuation of mouse acute colitis by naked hepatocyte growth factor gene transfer into the liver. (2006)
  • Author(s): Hanawa T, Suzuki K, Kawauchi Y, Takamura M, Yoneyama H, Han GD, Kawachi H, Shimizu F, Asakura H, Miyazaki J, Maruyama H, Aoyagi Y
  • Journal Title: J Gene Med. 8・5 Pages: 623-35
• [Journal Article] Increase of CD4+CD25+regulatory T-cells in the liver of patients with hepatocellular carcinoma. (2006)
  • Author(s): Yang XH, Yamagiwa S, Ichida T, Matsuda Y, Sugahara S, Watanabe H, Sato Y, Abo T, Horwitz DA, Aoyagi Y.
  • Journal Title: J Hepatol. 45・2 Pages: 254-62
• [Journal Article] 上部消化管内祝鏡検査後に,一過性全健忘を来した3症例 (2006)
  • Author(s): 塚田健一郎, 宮林千春, 古川浩一, 寺尾ゆみ子, 窪田芳樹, 綱島勝正, 青柳 豊
  • Journal Title: Gastroenterological Endoscopy 48 Pages: 1215-1220
• [Journal Article] 経皮内視鏡的胃瘻造設術(PEG)後の長期栄養管理 (2006)
  • Author(s): 合志 聡, 小林正明, 青柳 豊
  • Journal Title: 栄養評価と治療 23 Pages: 590-593
• [Book] 新薬展望,治療薬における最近の新薬の位置づけ,消化器治療薬 (2007)
  • Author(s): 成澤林太郎, 青柳 豊
  • Total Pages: 5
  • Publisher: 医薬ジャーナル
• [Book] 検査値のみかた,改訂3版,α-フェトプロテイン, AFPL3分画(フコシル化AFP分画) (2006)
  • Author(s): 青柳 豊
  • Total Pages: 7
  • Publisher: 中外医学社
• [Book] 検査値のみかた,改訂3版, PIVKA-II (2006)
  • Author(s): 青柳 豊
  • Total Pages: 4
  • Publisher: 中外医学社
• [Book] VI 肝臓, 5 肝細胞癌の病態と診断 Annual Review 消化器 (2006)
  • Author(s): 山際 訓, 松田康伸, 青柳 豊
  • Total Pages: 7
  • Publisher: 中外医学社
• [Book] 腫瘍マーカーの診断と予後推定のおける意義, AFP, AFPL3分画,臨床消化器内科 増刊号 (2006)
  • Author(s): 青柳 豊
  • Total Pages: 8
  • Publisher: 日本メディカルセンター
• [Book] 比較的若年の女性に起こった肝静脈閉塞症の一例,臨床消化器内科 (2006)
  • Author(s): 塙孝泰, 大越章吾, 青木洋平, 竹内学, 山際訓, 松田康伸, 野本実, 青柳 豊
  • Total Pages: 6
  • Publisher: 日本メディカルセンター