酸化ストレスによる平滑筋細胞の形質変換分子機構におけるTLR4の重要性

2005 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16590691
• Research Institution: Yamaguchi University
• Principal Investigator: 梅本 誠治 山口大学, 医学部附属病院, 助教授 (90263772)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 青木 浩樹 山口大学, 医学部, 助教授 (60322244) ; 吉村 耕一 山口大学, 医学部, 助手 (00322248)
• Keywords: シグナル伝達 / 高血圧 / 酸化ストレス / 炎症 / 平滑筋細胞 / Tall-like receptor

Research Abstract

12-16週C.C3H-7lr4^<lps-d>マウスおよびwild-type BALB/cマウスにOsmotic mini pumpを皮下に植え込みアンジオテンシンIIを4週間持続注入する群を作成するとともに、コントロールとしてノルエピネフリンを4週間持続注入する群を作成した.それぞれの薬剤投与にて、各群の血圧は100mmHg程度から160mmHgに有意に上昇したが両薬剤群間で有意差はなかった。大動脈を摘出し、内腔・中膜比をコンピューターにて画像解析を行った。免疫組織染色法にて収縮型ミオシン重鎖SM2と合成型ミオシン重鎖Smemb、NAD(P)H oxidaseの各コンポーネント(p22phox, p47phox)、NF-κB、MCP-1とTLR4の発現部位を検討するとともにdye Hydroethidine染色にて血管壁におけるsuperoxideの発現を検討した.その結果,TLR4欠損マウスでは,アンジオテンシンIIに対する血管壁の酸化ストレス増加がコントロール群よりも減弱していた.血管平滑筋細胞のSM2も低下が抑制され,アンジオテンシンIIによる平滑筋細胞の形質変換が抑制されていた.また,NAD(P) Hoxidase活性をchemiluminescence法で測定し、細胞内情報伝達系の評価としてMAPKを中心としたERK,JNKおよびp38、またはPI3 Kinase/Aktの発現をWestern blotにて検討し、血管の炎症に関わるサイトカインやケモカインネットワーク(IL-1α,IL-1β,IL-1Ra,IL-6,IFN-γ,MCP-1,IL-8など)の活性化とTLR4の関連をさらに検討中である.