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2004 Fiscal Year Annual Research Report

気道炎症における細胞質型ホスホリパーゼA_2の役割とそのリン酸化部位の決定

Research Project

Project/Area Number 16590742
Research InstitutionKanazawa University

Principal Investigator

明 茂治  金沢大学, 医学系研究科, 助手 (20313645)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 藤村 政樹  金沢大学, 医学系研究科, 助教授 (90190066)
Keywords細胞質型ホスホリパーゼA_2 / 気管支喘息 / TAT融合蛋白 / マウス
Research Abstract

細胞質型ホスホリパーゼA_2(cPLA_2)の522番目のアミノ酸までの蛋白は優位抑制型cPLA_2(dn-cPLA_2)として作用することが報告されていることから,dn-cPLA_2のcDNAをcPLA_2のcDNAを含むpCRII-cPLA_2からPCRにて増幅した後,TAT発現プラスミッドであるpTATのマルチクローニングサイトに挿入し,pTAT-dn-cPLA_2を作製した.また,同様にcPLA_2のcDNAをPCRによって増幅した後にpTATに挿入し,pTAT-cPLA_2を作製した.さらに,site-directed mutagenesisによって,cPLA_2のSer^<505>,Ser^<515>およびSer^<727>をアラニンに置換させたプラスミッド(それぞれ,pTAT-S505A-cPLA_2,pTAT-S515A-cPLA_2およびpTAT-S727A-cPLA_2)を作製した.プラスミッドをBL21大腸菌に導入し培養した後に,buffer Z(8 M urea,20mM HEPES,pH8.0,100mM NaCl)を溶媒としてソニケーションを行い,遠心の後に上清を回収しNi-NTAカラムに通した.イミダゾールにて抽出を行い,ポアサイズが10kDaの透析膜(10,000MWCO Slide-A-Lyzer^<【○!R】>)を用いて,ureaとイミダゾールの除去を行った.また,コントロール蛋白として,特別な機能を有さないとされる蛍光色素であるgreen fluorescent protein(GFP)とTATの融合蛋白(TAT-GFP)を作製した.

  • Research Products

    (3 results)

All 2004

All Journal Article (3 results)

  • [Journal Article] Importance of the angiotensin type 1 receptor in angiotensin II-induced bronchoconstriction and bronchial hyperresponsiveness in the guinea pig2004

    • Author(s)
      Watanabe K, Myou S, Fujimura M, Tachibana H, Kita T, Nakao S.
    • Journal Title

      Exp Lung Res 30・3

      Pages: 207-221

  • [Journal Article] Additive blockade of beta 2-integrin adhesion of eosinophils by salmeterol and fluticasone propionate2004

    • Author(s)
      Myo S, Zhu X, Myou S, Meliton AY, Liu J, Boetticher E, et al.
    • Journal Title

      Eur Respir J 23・4

      Pages: 511-517

  • [Journal Article] β_2-integrin adhesion caused by eotaxin but not IL-5 is blocked by PDE-4 inhibition and β_2-adrenoceptor activation in human eosinophils2004

    • Author(s)
      Liu J, Munoz NM, Meliton AY, Zhu X, Lambertino AT, Xu C, et al.
    • Journal Title

      Pulm Pharmacol Ther 17・2

      Pages: 73-79

URL: 

Published: 2006-07-12   Modified: 2016-04-21  

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