2004 Fiscal Year Annual Research Report
テロメア・テロメラーゼを介した造血器腫瘍の分子病態の解析と分子標的治療の開発
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16590965
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| Research Institution | Tokyo Medical University |
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Principal Investigator |
田内 哲三 東京医科大学, 医学部, 講師 (80281377)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
垣見 和宏 東京大学, 医学系研究科, 助教授 (80273358)
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| Keywords | テロメア / テロメラーゼ / 分子標的治療 / siRNA / G-quadruplex |
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| Research Abstract |
(1)hTERT-siRNA及びmTERT-siRNAを含む高力価レトロウイルス産生細胞の作成:
hTERT-siRNAを含むレトロウイルスベクターpMKP0.1p-C3はDr.Williams C.Hahnより供与済み。mTERT-siRNAは5'CCGG---sense---CTCGAG---antisense---TTTTTG3'(Forward oligo)、5'AATTCAAAAA---sense---CTCGAG---antisense---3'(Reverse oligo)を含むmTERT-siRNAを作成後、ecotropic packaging cell line GP86にリン酸カルシュウム沈降法を用いてトランスフェクトし、48時後にそのsupernatantをamphotropic packaging cell line PA317に添加し10^5 puroR CFU/ml以上の高力価ウイルスを作成した。
(2)テロメラーゼ阻害分子、G-quadruplex相互作用分子(telomestatin誘導体)によるアポトーシス誘導機構の解析:
平成13年度&平成14年度&平成15年度文部省科学研究補助金基盤研究(C)にて代表研究者はtelomestatinによるテロメラーゼ活性阻害によりK562細胞株ではPopulation Doubling (PD) 30にてテロメア長の短縮に引き続き、細胞増殖の停止、アポトーシスが誘導され、細胞増殖の停止のメカニズムにはDNA damageにて誘導されるATMキナーゼ、Chk2キナーゼ、及びp21CIP1、p27KIP1の発現が関与していることを報告した(Oncogene,2003,14;5338-5347)。平成16年度はStress Response Pathway(特にASK1、MKK、JNK、p38MAP Kinase)及びアポトーシス関連分子(Bad、Bid、Bax、Noxa、Apaf1、IAP、AIF)についてK562細胞及びCML患者のCD34陽性細胞を用いimmunoblote、in vitro kinase活性を行い、テロメラーゼ阻害状態におけるアポトーシス誘導にMKK3/6、p38MAPキナーゼの活性化が関与していることが明らかとなった。
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