マイクロサンプリング法を利用した気道被覆液解析による小型肺腺癌の診断に関する研究

2004 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16591411
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 渡辺 真純 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (90201227)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 長谷川 直樹 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (20198724) ; 江口 圭介 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (90232941) ; 藤本 博行 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20338073) ; 小林 紘一 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (80051704)
• Keywords: 気管支鏡 / マイクロサンプリング / 気道被覆液 / 肺癌 / プロテオーム解析

Research Abstract

1)肺癌患者における気管支鏡下マイクロサンプリング法による気道被覆液の採取
肺癌臨床症例10例で気管支鏡下MS法による気道被覆液(ELF)の採取を行った。
2)遠心法によるMSプローブからの高濃度ELF回収
従来のマイクロサンプリング法ではMSプローブからELFを回収する際に生理食塩水入りスピッツにプローブを入れてボルテックスすることにより抽出・回収していた。今回はプロテオーム解析用に高濃度ELFを回収するためスピッツ内に固定したプローブを遠心しELFそのものをスピッツ内に分離回収する方法を考案した。これにより5μl程度の回収が可能であった。
3)ELFからのプロテオーム解析
上記により回収したELFの1μlを用いてサイファージェン社プロテインチップシステムによる解析を行った。同法ではプロテインチップに捕捉されたタンパク質をパルスレーザー照射によってチップ表面からイオン化脱離し飛行させる。その飛行時間から質量数とイオン強度を測定する。陰イオン交換、陽イオン交換2種のプロトコールにより測定した。肺腺癌症例の解析で腫瘍側と健常側を比較したところ腫瘍側ELFでは陽イオン交換で3460、9280、20800kDa付近に健常側では認められないピークを検出した。また、陰イオン交換では5230kDa付近にピークを認めた。
本法によりELFからのタンパク質量分析が可能なことが判明したので症例数を増やし解析を続ける予定である。また、得られたピークのタンパクについてその同定を行う予定である。