2004 Fiscal Year Annual Research Report
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16591604
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| Research Institution | University of the Ryukyus |
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Principal Investigator |
内田 厚 琉球大学, 医学部附属病院, 講師 (80245571)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小川 由英 琉球大学, 医学部, 教授 (50051719)
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| Keywords | PSMA / 血管内皮 / 血管新生 / 前立腺癌 |
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| Research Abstract |
前立腺癌培養細胞株LNCaP細胞より抽出したDNAよりPCRにてPSMA enhancerを増幅し、luciferase発現plasmidにcloningした。これを用いて血管内皮細胞、乳癌細胞株MCF7の混合培養下でRNAを回収してRT-PCRを行ったところPSMA cDNAの発現が陽性であり、同様にWestern blotでもPSMAタンパク発現陽性が確認された。ただし、培養条件によって発現の程度が異なり、培養の至適条件の確認が必要と考えている。
培養血管内皮細胞としてHPAEC細胞、HUVEC細胞に、liposomeを用い、上記pPSM/lucを遺伝子導入後にMCF7と混合培養したのちluciferase assayを行い、reporter activityを定量した。その結果、定量の前にincubation timeを充分に長くとると、細胞増殖性の違いから血管内皮細胞に比して癌細胞の割合が多くなり、reporter assayの定量性に再現性が失われることから、両細胞の混合培養後に血管内皮細胞をcell sortingにより回収してから行うことを検討している。
PSMA発現による血管内皮細胞の形質変化の検討
PSMAの血管内皮細胞内での役割を調べるため、PSMAの過剰発現モデルの作製を試みた。
前立腺癌細胞LNCaPよりRNAを抽出し、RT-PCRにてPSMA cDNAを増幅し、TA cloning法でクローニングした(pENTR/TOPO plasmid, Invitrogen)。さらに発現ベクターであるpTREX-DEST30 plasmidにsubcloningを行う予定である。作製したplasmidを血管内皮細胞に強制発現させ細胞増殖性、cytokineの反応性の変化などを検討する予定である。
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