脂肪組織幹細胞移植による難治性皮膚潰瘍の治療法の開発

2004 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16591804
• Research Institution: Nippon Medical School
• Principal Investigator: 岩切 致 日本医科大学, 医学部, 助手 (50307899)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 水野 博司 日本医科大学, 医学部, 講師 (80343606) ; 赤石 諭史 日本医科大学, 医学部, 助手 (10373010) ; 村上 正洋 日本医科大学, 医学部, 講師 (00239500) ; 百束 比古 日本医科大学, 大学院・医学研究科, 教授 (00165135)
• Keywords: 間葉系幹細胞 / 脂肪 / 皮膚 / 再生医学 / 組織工学

Research Abstract

F344近郊系ラットの鼠径部脂肪塊より我々がこれまでに報告してきた脂肪組織由来幹細胞(Adipose derived Stem cells、以下ASC)精製プロトコールに従ってASCを獲得する。この初代ASCを10%FBS添加DME培地内で培養、継代を繰り返す。第3継代ASCをトリプシン処理後、細胞浮遊液を作成し、直径1.5cmのシリコン付アテロコラーゲンスポンジ1個あたり1x10^6個播種する。播種後この再度100mmディッシュ内で培養を継続後、1,3,5,7日後にコラーゲンスポンジ内の細胞数をカウントし増殖曲線を作成したところ、7日目までは比例的に細胞増殖することを確認できた。
次に、同系ラットの背部皮膚に直径1.5cmの肉様膜を含めた全層皮膚欠損層を作成した後濃度1mg/mlのマイトマイシンCを皮膚欠損創に10分間塗布し難治性皮膚潰瘍モデルを作成した。そこに上記条件のASC組み込みコラーゲンスポンジを移植し。移植後7および14日後に標本を採取しパラフィン標本を作成しHE染色による形成肉芽組織の形態学的評価、特に肉芽組織の増殖の程度や新生血管の程度を評価した。対象群はアテロコラーゲンスポンジ単独移植群とした。
その結果、移植後7日目における肉芽組織の厚さはコントロール群と比較して実験群において有意に増大しており、移植後14日目においても有意差は認めなかったものの、実験群のほうが良好な肉芽組織の形成を誘導することが出来た。また1視野あたりの新生血管数を計測したところ、いずれの時期においてもコントロール群と比較して実験群において有意に増加していた。以上よりASC含浸コラーゲンスポンジは創傷治癒促進効果を有する可能性が示唆された。
今後は走査電子顕微鏡による微細な形態学的評価ならびに各種サイトカインの定量を試みる予定である。