2004 Fiscal Year Annual Research Report
歯周病原性細菌バイオフィルム形成における共凝集の役割とその病原性
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16591837
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| Research Institution | Tokyo Dental College |
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Principal Investigator |
石原 和幸 東京歯科大学, 歯学部, 助教授 (00212910)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中山 浩次 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究所, 教授 (80150473)
加藤 哲男 東京歯科大学, 歯学部, 助教授 (00159253)
山中 あゆみ 東京歯科大学, 歯学部, 助手 (40231667)
君塚 隆太 東京歯科大学, 歯学部, 助手 (90287178)
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| Keywords | Biofilm / Coaggregation / Treponema denticola / Porphyromonas gingivalis / Periodontitis / Arg-gingipain / Lys-gingipain / Pathogenicity |
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| Research Abstract |
Porphyromonas gingivalisは、成人性歯周炎の主要な原因菌で、付着性線毛、内毒素、タンパク分解酵素などの病原因子を有する。本菌のバイオフィルム形成には、歯周炎の病巣局所でTreponema denticola等の細菌と共凝集する作用が関与している可能性がある。我々は、T.denticolaとの共凝集について解析を行い、歯周病原菌のバイオフィルム形成での共凝集の役割を明らかにすることを試みた。
方法:P.gingivalis33277株とT.denticola ATCC 35405株の共凝集は、coaggregation buffer中で行い、凝集を肉眼と懸濁液の吸光度の変化によって測定した。P.gingivalisの表層プロテアーゼ(arg-gingipain A, B, lys-gingipain)が共凝集に与える影響を明らかにするために、gingipainの欠損株を用いた。P.gingivalis 33277株とT.denticola ATCC 35405株間の共凝集因子検出するため、P.gingivalis381超音波破砕上清を泳動後PVDF膜に転写した。この膜にT.denticola ATCC 35405株超音波破砕上清を反応させ、付着したタンパクを抗T.denticolaウサギ免疫血清により検出した。
結果及び考察:P.gingivalis 33277株とT.denticola ATCC 35405株の共凝集は、arginineやleupeptin処理により低下した。P.gingivalis kgp, rgpA, rgpBおよびkgp, rgpA, hagAの欠損株とT.denticola ATCC35405株の間では共凝集反応は、ほとんどみられなかった。Immunoblotの結果、T.denticola ATCC35405株の超音波破砕上清は、P.gingivalis 381株の69kDaと56.8kDaのbandに結合していた。
P.gingivalisのT.denticolaとの共凝集には、gingipainが関与していると考えられる。今後さらに共凝集のメカニズム及び菌種間のquorum sensing等について解析を加える予定である。
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