2004 Fiscal Year Annual Research Report
頭頸部癌に対するセリンプロテアーゼインヒビターを用いた遺伝子治療の研究
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16591991
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
光藤 健司 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (70303641)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤内 祝 名古屋大学, 医学部, 教授 (50172127)
水野 正明 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (70283439)
上田 実 名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (00151803)
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| Keywords | LEKTI / セリンプロテアーゼインヒビター / 頭頸部癌 / アデノウイルスベクター / アデノ随伴ウイルスベクター |
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| Research Abstract |
1.in vitroにおける遺伝子導入効率および細胞毒性の検討
現在までにlacZ遺伝予を含むアデノウイルスベクター(Ad-lacZ)およびアデノ随伴ウイルスベクター(AAV-lacZ)を用い、このセリンプロテアーゼインヒビターであるLymphoepitelial Kazal-type-related inhibitor(LEKTI) full length cDNAを両ベクターに組み込み、Ad-lacZ-LEKTIおよびAAV-lacZ-LEKTIの作成を行った。腫瘍はヒト口腔扁平上皮癌出来のSAS,HSC-2,3,4を用いた。またAd-lacZ、AAV-lacZを用いて、SASおよびHSC2,3,4細胞にLacZ遺伝子の導入が可能であることが確かめられている。これらの腫瘍細胞をチャンバースライドに播種し、24時間後Ad-lacZ-LEKTIを各種濃度で感染させ,さらに72時間培養後X-gal染色し遺伝子導入効率および細胞毒性について検討し,至適投与濃度を決定した。その結果、導入効率はMOI=1(MOI:細胞1個あたりのウイルス数)で20%程度、MOI=10ではほぼ100%であった。また、MOI=100以上で細胞毒性を示した。以上よりMOI=1,MOI=10を至適濃度とした。
2.in vitroにおける殺細胞効果の検討
同様の方法で腫瘍細胞を播種し24時間後,1にて決定した至適投与濃度(MOI=1,MOI=10)にてAd-lacZ-LEKTIおよびAAV-lacZ-LEKTIを感染させ、さらに72時間培養後生細胞数を計測し、細胞生存率を算定し、未処置群との比較を現在検討中である。
以上の結果を巾間報告として10^<th> International Congress on Oral Cancer (2005年4月ギリシャ)にて報告する予定である。また、研究結果はConsequences of C-terminal domains and N-terminal signal peptide deletions on LEKTI secretion, stability and subcellular distributionとしてArchives of Biochemistry and Biophysicsに論文発表された。
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