2004 Fiscal Year Annual Research Report
電磁場による染色体障害作用をコメットアッセイにより直接検出するための研究
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16659153
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| Research Institution | Jikei University School of Medicine |
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Principal Investigator |
清水 英佑 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (80056879)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宮越 雄一 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (00343533)
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| Keywords | 電磁場 / コメットアッセイ / DNA損傷 / アストロサイト / 染色体障害 |
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| Research Abstract |
研究方法
生後4-5日齢のSD系雄性ラットよりアストロサイト初代培養細胞を分離した。培養アストロサイトに脳腫瘍誘発物質のethylnitorosourea(ENU), methylnitorosurea(MNU), butylnitorosourea(BNU), methylmethane sulfonate(MMS)及びpropane sultone(PS)を1時間(37℃)曝露した。Trypsin-EDTAにより細胞を回収し、0.5%低融点アガロースと混合した後に、スライドガラス上にその細胞を含むアガロースゲルを滴下した。ゲル固化後、4℃のlysis solutionに一晩浸漬した。水酸化ナトリウム溶液(pH13.8)に20分間浸漬し、DNAをunwindingした後、0.7 V/cm、250mAの条件で水酸化ナトリウム溶液中(pH13.8)にて30分間電気泳動した。エチジウムブロマイドで染色し、蛍光顕微鏡で観察した。コメットアッセイ分析ソフトにて50個の細胞を画像解析し、DNA migrationを指標にDNA損傷を検討した。
結果及び考察
5種の化学物質総てにおいて、用量依存的にDNA損傷の増加が認められた。またDNA損傷の程度は、MMS、MNU、PS、BNU、ENUの順に強く見られた。
今後は、今回の結果を基礎データとして、電磁場と脳腫瘍誘発物質との複合曝露によりDNA損傷が増加するか、減少するかどうかを検討していく予定である。また他の培養細胞や動物を用いてコメットアッセイを行うことや、DNA損傷のメカニズムが解明されている化学物質(抗がん剤など)を用いて、電磁場と化学物質の複合曝露によるDNA損傷の変化を併せて検討していく予定である。
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