2004 Fiscal Year Annual Research Report
可逆性不死化培養心筋細胞を用いたペースメーカー細胞の再生
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16659203
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
中村 一文 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (10335630)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
草野 研吾 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 講師 (60314689)
大江 透 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (70263556)
清水 壽一郎 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 講師 (80294403)
小林 直哉 岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 助手 (10325102)
梶谷 文彦 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (70029114)
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| Keywords | 不死化 / 可逆性不死化システム / ペースメーカー / Creリコンビナーゼ / 心筋細胞株 / SV40T / Cell Cycle / 細胞移植 |
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| Research Abstract |
1)背景:心筋細胞はほとんど分裂能を持たないため、培養心筋細胞を増やして長期に渡って維持し、その後ペースメーカー機能の付加など種々の操作を加えたり、移植に用いることは今まで不可能であった。
目的:そこでまず移植可能な安全かつ大量の心筋細胞をえることを目的とした。
方法:可逆性不死化システムを備えたレトロウィルスベクターSSR#69を用いて、新生児ラット培養心筋細胞に不死化遺伝子を導入した。このシステムでは不死化遺伝子であるSimian virus 40 largeT抗原(SV40T)によって細胞を不死化して増やした後に、Creリコンビナーゼ発現アデノウィルスベクター(AxCANCre)を用いて、SV40T遺伝子を除去し安全な心筋株にもどすことができる。
結果:SSR#69により新生児ラット培養心筋細胞には心筋細胞の核がSV40Tが発現するようになり、現在までに142回細胞の分裂を認め、増え続けている。この細胞はCreリコンビナーゼにより速やかにSV40Tが取り除かれ、増殖を停止した。Cell CycleをLaser Scanning Cytometerで観察した。Creを作用させる前のSV40Tを含む不死化心筋ではS期及びG2期に移行、細胞分裂(M期)が誘導された。Creを作用させたSV40T除去後の細胞ではG0/G1期に停止した。樹立不死化心筋株をanti-myosin heavy chainIIA抗体(mouse monoclonal)及びanti-alpha-sarcomeric actin (mouse monoclonal)にて染色したところ、両方の発現を認めた。
結語:SSR#69による可逆性不死化心筋細胞株の作製に成功した(Circ J.2005)
2)ペースメーカー電流をつくるHCN遺伝子が固有心筋に発現しているかどうかをみたところ、発現していた。(J Biol Chem.2004)
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