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2005 Fiscal Year Annual Research Report

動物細胞のDNA鎖切断修復と非相同組換えに関する逆遺伝学的解析

Research Project

Project/Area Number 16790058
Research InstitutionYokohama City University

Principal Investigator

足立 典隆  横浜市立大学, 木原生物学研究所, 助手 (30264675)

KeywordsDNA鎖切断 / DNA修復 / エンドジョイニング / ランダムインテグレーション / ジーンターゲティング / 非相同組換え
Research Abstract

ヒトNalm-6細胞およびニワトリDT40細胞を用いて,一本鎖DNA切断修復/塩基除去修復機構の解析を行った。具体的には,DT40細胞のFEN1変異株,DNAポリメラーゼβ変異株,FEN1/DNAポリメラーゼβ二重変異株の表現型解析と,Nalm-6細胞のDNAポリメラーゼβ変異株の作製と表現型解析を行った。その結果,アルキル化剤によるDNA損傷の修復においてショートパッチ経路,ロングパッチ経路がともに重要であるのに対し,酸化的損傷に対してはロングパッチ経路のみが重要であることを明らかにした。この結果は生化学的手法によっても確認できた。また,二本鎖DNA切断修復についても詳細な解析を行った。エンドジョイニング変異株の解析から,エンドジョイニング阻害によりランダムインテグレーションを抑制できることを明らかにした。さらに,本研究では,Nalm-6細胞を用いて,Rad54や,Xrcc3,Ku70,Ku80,DNA ligase III, DNA ligase IなどDNA一本鎖/二本鎖切断修復への関与が示唆される遺伝子およびp53遺伝子について,順次ジーンターゲティングを行った。また,これら遺伝子の二重変異株の作製を進めた。これら一連の変異株を利用して,トポイソメラーゼ阻害剤などの抗がん剤の細胞傷害作用を増強させる方策を考察した。また,DNAligase IV破壊株を詳しく解析した結果,ヒトとニワトリとで表現型が異なることを明らかにした。

  • Research Products

    (4 results)

All 2006

All Journal Article (4 results)

  • [Journal Article] Enhanced gene targeting efficiency by siRNA that silences the expression of the Bloom syndrome gene in human cells.2006

    • Author(s)
      So, S.et al.
    • Journal Title

      Genes Cells 11(4)

      Pages: 363-371

  • [Journal Article] Parp-1 protects homologous recombination from interference by Ku and Ligase IV in vertebrate cells.2006

    • Author(s)
      Hochegger, H. et al.
    • Journal Title

      EMBO J. 25(6)

      Pages: 1305-1314

  • [Journal Article] The human pre-B cell line Nalm-6 is highly proficient in gene targeting by homologous recombination.2006

    • Author(s)
      Adachi, N. et al.
    • Journal Title

      DNA Cell Biol. 25(1)

      Pages: 19-24

  • [Journal Article] Heterozygous inactivation of human Ku70/Ku86 heterodimer does not affect cell growth, double-strand break repair, or genome integrity.2006

    • Author(s)
      Uegaki, K. et al.
    • Journal Title

      DNA Repair 5(3)

      Pages: 303-311

URL: 

Published: 2007-04-02   Modified: 2016-04-21  

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