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2004 Fiscal Year Annual Research Report

MGB技術を用いた造血器腫瘍における微小残存病変定量法の開発

Research Project

Project/Area Number 16790212
Research InstitutionIwate Medical University

Principal Investigator

阿保 亜紀子  岩手医科大学, 医学部, 助手 (80326686)

KeywordsALL / NHL / MRD / MGB-ASO RO-PCR assay / 免疫受容体遺伝子 / 蛍光プローブ / IgH / IgL
Research Abstract

(目的)
我々は,造血器腫瘍において免疫受容体遺伝子の多様性を利用した,allele - specific oligonucleotide real-time quantitative PCR (ASO RQ-PCR)法によるMRDの定量的法を開発・実践してきた.本法では,多様な免疫受容体遺伝子の共通領域にconsensus probeを設定することで,蛍光プローブの大幅なコストダウンに成功し,検査室レベルでの臨床応用を可能にした.しかし,(1)N-regionが数塩基と短い場合には偽陽性が生じる,(2)NHLではプローブのに生じたmutationのためにconsensus probeを使えない場合がる,などの欠点があった.これらの理由で解析不可能な症例は,小児ALLで10%,悪性リンパ腫で30-40%であった.そこで当該研究課題では,これらの問題を解決するために,最近開発されたMBG (minor groove binder)技術を応用したプローブ・プライマーを用いることにした.
(方法)
(1)基礎的検討
1.ALL100例の初診時骨髄単核球からDNAを抽出し,IgH, Igκ, Igλ, TCRについて増幅する.
2.NHL70例についても診断時,リンパ節ならびに,骨髄単核球からDNAを抽出し,IgH, Igκ, Igλ, TCRについて増幅する.
3.増幅したPCR断片をpGEM-T easy vectorに挿入し,クローニングシークエンスを行い,塩基配列を決定する.
4.共通領域を決定し,MGBブローブ/プライマー(ASO-primers)をprimer express (ABI v1.5)を用いて設計する.(IgHのVH geneについてはconsensus probe/primerは決定済み)
(2)ALL, NHL患者の治療後1ヶ月,3ヶ月,6ヶ月,12ヶ月における骨髄あるいは末梢血単核球からDNAを抽出し,ABI prism 7700(ABI)を用いて,MRDをMGB-ASO RQ-PCR assayを用いて定量化する.
(結果)
1.ALL 78例の初診時骨髄単核球からDNAを抽出し,78例中61例(78%)でIgH遺伝子を増幅し得た.クローニングシークエンスを行い,塩基配列を決定した.
2.ALL 61例において10本のMGBプローブを作製し,さらに症例特異的なASO-primersを設計した.
3.ALL 61中44例において治療後1ヶ月,3ヶ月,6ヶ月における骨髄から単核球からDNAを抽出し,MRDをMGB-ASO RQ-PCR assayを用いて定量化した.
(考察)
MBG技術を応用したALLのMRD定量化システムは腫瘍特異性,感度に優れ,効率的な臨床応用が可能である.

  • Research Products

    (3 results)

All 2005 2004

All Journal Article (3 results)

  • [Journal Article] Distinguishing between proliferating nodal lymphoid blasts in chronic myelogenous leukaemia and non-Hodgin lymphoma : A report of three cases and detection of a bcr/abl fusion signal by single cell analysis.2005

    • Author(s)
      Yashima-Abo A, Satoh T, Abo T, Aoki Y, Kowata S, Ito S, Ishida Y, Funiiwara H, Maesawa C, Masuda T.
    • Journal Title

      Pathol Int. 55

      Pages: 273-279

  • [Journal Article] Consensus JH gene probes with conjugated 3'-minor groove binder for monitoring minimal residual disease in acute lymphoblastic leukemia.2004

    • Author(s)
      Uchiyama M, Maesawa C, Yashima-Abo A, Tarusawa M, Endo M, Sugasawa W, Chida S, Onodera S, Tsukushi Y, Ishida Y, Tsuchiya S, Masuda T
    • Journal Title

      J Mol Diagn. 7

      Pages: 121-126

  • [Journal Article] Short consensus probes with 3'-minor groove binder of the immunoglobulin heavy-chain gene for real-time quantitative PCR in B-cell non-Hodgkin lymphomas.2004

    • Author(s)
      Uchiyama M, Maesawa C, Yashima-Abo A, Tarusawa M, Satoh T, Ishida Y, Ito S, Murai K, Enomoto S, Utsugisawa T, Masuda T.
    • Journal Title

      Lab Invest. 84

      Pages: 932-936

URL: 

Published: 2006-07-12   Modified: 2016-04-21  

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