2005 Fiscal Year Annual Research Report
Stem Cell Factor遺伝子の転写調節機構の解析
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16790645
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Research Institution | Hiroshima University |
Principal Investigator |
三原 祥嗣 広島大学, 自然科学研究支援開発センター, 助手 (90325168)
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Keywords | Stem cell factor / IL-6 / マスト細胞 / 線維芽細 / プロモーター / 転写因子 |
Research Abstract |
我々は線維芽細胞をIL-6にて刺激すると、線維芽細胞内のSTAT3を介してStem Cell Factor (SCF)が産生されることを明らかにしてきた。さらにSCFの転写調節機構を解析する目的でSCFのプロモーター解析を行った。SCF遺伝子の上流-500〜-1をルシフェラーゼ発現ベクターにサブクローニング後、マウス線維芽細胞NIH3T3に遺伝子導入した。IL-6ファミリーサイトカインであるIL-6,OSM, LIFと、IL-4にて刺激し、ルシフェラーゼ活性を測定したところ、OSM>IL-6>LIFの順で強い活性の上昇が確認されたが、IL-4刺激による活性の上昇はみられなかった。次にSCF遺伝子の上流-450〜-1、-405〜-1、-360〜-1、-300〜-1,-250〜-1、-200〜-1,-100〜-1をそれぞれPCRで増幅し,ルシフェラーゼ発現ベクターにサブクローニングした。同様の方法でルシフェラーゼ活性を測定した結果、-450〜-1、-405〜-1、-360〜-1、-300〜-1のみに活性がみられた。さらに-500〜-386、-500〜-288、-500〜-198、-500〜-103のベクターで同様にルシフェラーゼ活性を測定すると、-500〜-198、-500〜-103のみに活性がみられた。以上の結果から-288〜-250の領域がIL-6ファミリーサイトカイン刺激において重要な領域であることが明らかになった。SCFのプロモーター領域にはSTAT3の結合配列はないが、-288〜-250の領域には転写因子ELK1の結合配列があることより、IL-6ファミリーサイトカイン刺激によりSTAT3とELK1が協調的に働いてSCFのプロモーター活性を上昇させることが示唆された。
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