HBs抗原粒子をベクターとしたヒト肝細胞に対する遺伝子治療の開発

2004 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16790785
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 宮田 量平 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20327571)
• Keywords: L粒子 / HBs抗原粒子 / HGF

Research Abstract

ヒト肝細胞癌に対して特異的に抗腫瘍効果を持つことのin vitroでの確認
正常ヒト肝細胞株と肝細胞癌株(HepG2,HepC3A,NuE)にHGF封入HBs抗原粒子を導入し,HGF,EGFP,FLAGの発現をEUSA,Western blot,-蛍光顕微鏡を用いて解析する.
対照として大腸癌株(WiDr,HT29)を使用しHGF封入HBs抗原粒子を導入し,HGFの活性部位の発現をELISA,Western blot等で解析する
HGFの抗腫瘍効果・肝再生の判定はMTT assayで行う.
HepC3Aでは抗腫瘍効果を認めたが対照の大腸癌株(WiDr)では抗腫瘍効果を認めなかった.
ヒト肝細胞癌に対して特異的に抗腫瘍効果を持つことのin vivoでの確認
肝細胞癌株(HepG2,HepC3A,NuE),大腸癌株(WiDr,HT29)をそれぞれマウスの皮下に移植し担癌マウスを作製.対照として正常ヒト肝組織移植ヌードマウスを作製.
HGFを封入したL粒子をマウスの尾静脈から静注し,経時的に腫瘍径を測定やHE染色で細胞形態やApoptotic Indexを検討し抗腫瘍効果を判定する.
肝再生はBrdU Labelling IndexやCell Growth Assay, propidium iodineを用いたCell Cycle Analysisなどを用いて判定する.
HGF封入L粒子は肝細胞癌株(HepG2)で腫瘍径の縮小を認めたが,対照の大腸癌株(WiDr)では抗腫瘍効果を認めなかった.