2005 Fiscal Year Annual Research Report
肺癌における新規メチル化領域の網羅的検索と癌関連遺伝子の同定
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16790795
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
横井 左奈 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助手 (30372452)
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| Keywords | 肺癌 / メチル化 / ゲノムアレイ |
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| Research Abstract |
申請者は、独自に開発してきたBACクローンを搭載したゲノムアレイを用いて肺癌細胞株49株のゲノムコピー数解析を行ってきた。
また、既に確立されているDNAメチル化領域の特異的増幅法であるMCA(methylated CpG island amplification)法を、このBACアレイ上で展開することにより、癌においてDNAメチル化異常をきたす領域のhigh-throughputな網羅的探索法(BAC array-based MCA(BAMCA)法)を確立した。この方法は、メチル化感受性制限酵素SmaIおよびメチル化非感受性制限酵素XmaIでDNAを消化することにより、XmaIサイトにアダプターを付加しPCRを行う。するとDNAメチル化配列を両端に持つDNA断片が得られ、これを蛍光色素(Cy3またはCy5)で標識し、ゲノムアレイにハイブリダイズするものである。本法を用いて肺非小細胞癌細胞株におけるDNAメチル化異常をスクリーニングした。
その結果、9q33領域に存在するDBC1は、そのプロモーター領域が高頻度にメチル化を受けることにより発現抑制されていた。また、DBC1を肺癌細胞株に強制発現させるとコロニー形成能が低下し、肺癌における新たな癌抑制遺伝子と考えられた(Izumi H et al.Hum Mol Genet 2005)。
以上より、研究目的は達成されたと考える。また、DNAメチル化領域を更に効率よく絞り込む方法として、メチル化DNA結合蛋白質であるMeCP2の抗体を用いたクロマチン免疫沈降法を行い、回収されたゲノム断片をBACアレイにハイブリダイゼーションする方法(ChIP on BAC array)を進めている。
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