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2016 Fiscal Year Annual Research Report

ヒト細胞のDNA損傷トレランスの連携制御メカニズムの解析

Research Project

Project/Area Number 16H01775
Research InstitutionNagoya University

Principal Investigator

益谷 央豪  名古屋大学, 環境医学研究所, 教授 (40241252)

Project Period (FY) 2016-04-01 – 2020-03-31
Keywords損傷乗り越えDNA複製 / DNAポリメラーゼ・イータ / PCNA / ユビキチン化
Outline of Annual Research Achievements

ヒト細胞のゲノム安定性制御を理解することを目指して、ゲノム上にDNA損傷を残したままDNA複製の阻害を回避する損傷トレランス機構に着目し、初年度は以下の解析を行った。
I.ヒトDNAポリメラーゼ・イータとPCNAの相互作用による損傷乗り越え複製(TLS:translesion synthesis)の制御機構解明のために、イータの3つの特徴的なPCNA相互作用モチーフ(PIP)をコンセンサス型に改変した各種変異体を作出し、それらを発現させたヒト培養細胞株を作出した結果、一部の変異型を恒常的に発現させた細胞株は細胞増殖に異常をきたす可能性があることを明らかにした。一方、イータには、従来報告されている領域以外に、RAD18と相互作用する領域が存在することを見い出し、その同定を進めた。
II.HLTFによるPCNAのポリユビキチン化の分子機構を解明するために、無細胞系における反応機序の解析を進め、HLTFの活性化に寄与するDNA構造の探索を行った。一方で、ポリユビキチン化PCNAをもにユビキチン化PCNAに変換する活性を指標としてタンパク質を精製・同定した。そして、その遺伝子破壊細胞株を作出した。
III.PCNAホモ3量体の複数の分子が同時に翻訳後修飾を受けることにより活性化される未知の損傷トレランス機構を明らかにするために、PCNAのマルチ修飾を抑制した細胞株にDNA損傷を与えた後のDNA合成遅延、一本鎖DNAの露出、DNA鎖切断、チェックポイント機構の活性化を検出した。また、この機構に関与する因子のスクリーニングを実施した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

PIPを改変したDNAポリメラーゼ・イータを恒常的に発現させたヒト細胞株の樹立が困難な可能性を示唆する結果等の結果も得られたが、発現誘導系を用いた細胞株の樹立するなどの対応策により、おおむね予定通りに計画を進めることができている。

Strategy for Future Research Activity

ヒトDNAポリメラーゼ・イータが持つ3つのPCNA相互作用領域の生理的異議については、改変型イータを恒常的に発現する細胞株に加えて、発現誘導系を用いた解析を併用することにより、その生理的意義を解析する。PCNAのポリユビキチン化機構については、初年度に明らかにしたHLTFのDNA要求性を、さらに詳細に明らかにしていくとともに、脱ユビキチン化経路との関連にも留意して解析を進めていく。加えて、PCNAのマルチ修飾の破壊細胞の解析を継続することにより、未同定のDNA損傷トレランス経路の解析を推し進める。

  • Research Products

    (15 results)

All 2017 2016

All Journal Article (1 results) (of which Acknowledgement Compliant: 1 results) Presentation (14 results) (of which Int'l Joint Research: 6 results,  Invited: 3 results)

  • [Journal Article] DNA polymerase eta2016

    • Author(s)
      Masutani C, Kanao R, Hanaoka F
    • Journal Title

      Function of translesion DNA polymerases in genome stability

      Volume: - Pages: 73-90

    • Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] PCNAの翻訳後修飾が制御するDNA損傷トレランス機構2017

    • Author(s)
      金尾梨絵, 増田雄司, 益谷央豪
    • Organizer
      日本薬学会第137年会
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      2017-03-24 – 2017-03-27
  • [Presentation] 損傷乗り越えDNA複製とその制御機構2017

    • Author(s)
      益谷央豪
    • Organizer
      太陽紫外線防御研究委員会第27回シンポジウム「太陽紫外線の生体影響研究:原状と今後の展開」
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      2017-03-17 – 2017-03-17
    • Invited
  • [Presentation] USP7はPCNAのユビキチン化を制御して酸化的DNA損傷による突然変異を抑制する2017

    • Author(s)
      益谷央豪, 柏葉脩一郎, 金尾梨絵, 楠本理加, 花岡文雄, 増田雄司
    • Organizer
      第34回染色体ワークショップ/第15回核ダイナミクス研究会
    • Place of Presentation
      木更津
    • Year and Date
      2017-01-11 – 2017-01-13
  • [Presentation] PCNAの翻訳後修飾が制御するDNA損傷トレランスの解析2016

    • Author(s)
      金尾梨絵, 増田雄司, 益谷央豪
    • Organizer
      第39回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2016-11-30 – 2016-12-02
  • [Presentation] Regulation of DNA-dependent ubiquitin ligase activity of HLTF, a human homologue of yeast Rad5.2016

    • Author(s)
      Masuda Y, Mitsuyuki S, Masutani C
    • Organizer
      The 10th 3R (Replication, Recombination and Repair) symposium
    • Place of Presentation
      松江
    • Year and Date
      2016-11-13 – 2016-11-17
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Suppression of PCNA ubiquitination and oxidative stress-induced mutagenesis by USP72016

    • Author(s)
      Kanao R, Kashiwaba S, Masuda Y, Kusumoto-Matsuo R, Hanaoka F, Masutani C
    • Organizer
      The 10th 3R (Replication, Recombination and Repair) symposium
    • Place of Presentation
      松江
    • Year and Date
      2016-11-13 – 2016-11-17
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] PCNAとの相互作用によるヒトDNAポリメラーゼetaの制御機構2016

    • Author(s)
      増田雄司, 金尾梨絵, 益谷央豪
    • Organizer
      日本放射線影響学会第59回大会
    • Place of Presentation
      広島
    • Year and Date
      2016-10-26 – 2016-10-28
    • Invited
  • [Presentation] PCNAの翻訳後修飾の可逆的な制御による突然変異抑制機構の解析2016

    • Author(s)
      益谷央豪, 金尾梨絵, 柏葉脩一郎, 松尾(楠本)理加, 増田雄司
    • Organizer
      日本放射線影響学会第59回大会
    • Place of Presentation
      広島
    • Year and Date
      2016-10-26 – 2016-10-28
  • [Presentation] Mutant analysis of human DNA polymerase eta based on high-resolution crystal structures of the protein-DNA-dNTP complex.2016

    • Author(s)
      Hanaoka F, Yokoi M, Masutani C, Yang W
    • Organizer
      DNA polymerase meeting: from molecular function to human diseases
    • Place of Presentation
      Biarritz, France
    • Year and Date
      2016-10-04 – 2016-10-08
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] ユビキチンリガーゼRAD5のヒトホモログHLTF2016

    • Author(s)
      増田雄司, 金尾梨絵, 益谷央豪
    • Organizer
      変異機構研究会・第29回夏の学校
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2016-09-10 – 2016-09-11
  • [Presentation] SWI/SNFファミリーのユビキチンリガーゼRAD5のヒトホモログHLTFの生化学的解析2016

    • Author(s)
      増田雄司, 金尾梨絵, 益谷央豪
    • Organizer
      日本遺伝学会88回大会
    • Place of Presentation
      三島
    • Year and Date
      2016-09-07 – 2016-09-09
  • [Presentation] Regulation of translesion DNA synthesis and genomic stability in human cells.2016

    • Author(s)
      Masutani C
    • Organizer
      The 32th RBC International Symposium “Growing edge of radiation biology, from principles to applications”
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2016-09-01 – 2016-09-02
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Mechanism of multiple lysine 48-linked ubiquitin chain synthesis by E6AP.2016

    • Author(s)
      Masuda Y, Saeki Y, Yanaka S, Kawai H, Kukimoto I, Kato K, Tanaka K, Masutani C
    • Organizer
      FASEB Science Research Conference, UBIQUITIN & CELLULAR REGULATION
    • Place of Presentation
      Montana, U.S.A.
    • Year and Date
      2016-06-12 – 2016-06-17
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] USP7 suppresses H2O2-induced mutagenesis by regulating PCNA ubiquitination in human cells.2016

    • Author(s)
      Masutani C, Kashiwaba S, Kanao R, Kusumoto-Matsuo R, Hanaoka F, Masuda Y
    • Organizer
      Gordon Research Conference, Mutagenesis
    • Place of Presentation
      Girona, Spain
    • Year and Date
      2016-06-05 – 2016-06-10
    • Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2018-01-16  

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