2016 Fiscal Year Annual Research Report
ネガティブレギュレーションを全て解除した基幹化合物生産細胞工場の創製
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16H04578
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
近藤 昭彦 神戸大学, 科学技術イノベーション研究科, 教授 (40205547)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 勉 神戸大学, 工学研究科, 准教授 (90436551)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | バイオリファイナリー / 代謝工学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、細胞内におけるフィードバック阻害及び様々なレギュレーションの解除にむけた検討を行った。モデル系としてフィードバック阻害を解除できる変異が知られているリジン合成系を用いた。この変異体をゲノムに組み込むことができる系を構築し、阻害について検討した。野生型と比較して、変異株はリジンの生産量が向上し、ゲノムを改変することでフィードバック阻害を解除することができた。続いて、同様にフェニルアラニンの阻害についても検討を行った。こちらは既存の異種微生物由来の変異体を導入することで阻害を解除することができた。ゲノム組み込みとプラスミド過剰発現との効果の比較については、現在も検討を進めているところである。並行して、同様にアルギニンについても検討を行った。アルギニンは阻害を解除された変異体の報告例があるものの、導入による阻害解除は認められなかった。そこでアルギニン合成系を遮断することで、アルギニン要求株を構築した。今後はこの株を用いて阻害解除の検討を行っていく。また、生合成経路ではなく、転写因子や活性制御因子についても検討を進めた。こちらも既に報告例のあるRpoSなどの因子を破壊することで、上述の株に対して阻害を解除することができた。しかし、直接生合成に関与する酵素に比べるとその効果は限定的であった。これより、生合成経路に直接関与する酵素に対する検討を先に進め、その結果に追加する形で転写因子について検討を進める。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
基盤となる阻害解除株を構築できており、またゲノム改変技術についても改良することができており、順調に進展している。
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| Strategy for Future Research Activity |
構築した株に対して阻害解除のための改変及びスクリーニングを進める
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