2018 Fiscal Year Annual Research Report
Studies on PCNA loading onto newly synthesized leading DNA by Ctf18-RFC/Pole complex
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16H04743
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
釣本 敏樹 九州大学, 理学研究院, 教授 (30163885)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大橋 英治 九州大学, 理学研究院, 助教 (90378951)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | DNA複製 / 複製フォーク / DNAポリメラーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
真核生物ではPCNAがS期に染色体DNAに装着され、複製進行、染色体再構築を制御する。従来、複製時のPCNA装着は主要なローダーであるRFCによって高頻度でラギング鎖に装着されること明確であったが、リーディング鎖への能動的な装着のしくみは不明であった。我々はRFC類似複合体Ctf18-RFCがリーディング鎖DNAポリメラーゼPolεと複合体になってPCNAローダーとして機能することを示した。さらにこれを使ってPCNA 装着とDNA合成様式の関係を解析した。その結果、この複合体では (Polε/PCNAによる安定な合成→合成の停止とPCNAの解離→Ctf18-RFCによるPCNAの装着→Polε/PCNAによるDNA合成の再開) というサイクルが行われ、安定で長いリーディング鎖が合成されることを示した。つまりリーディング鎖合成では、安定性が十分でないPolεによるDNA合成に対して、結合しているCtf18-RFCによって頻繁にPCNAが装着され安定にDNAが合成される。その結果、リーディング鎖DNAでもPCNAが能動的に装着されることになる。さらに、より完全な複製複合体を得るために複製型ヘリカーゼであるヒトCMG複合体を精製し、DNAポリメラーゼホロ複合体CMG/Polε/Ctf18-RFCの再構築を行った。これを使ってリーディング鎖合成過程でCMG/PolεによるDNA合成とPolε/Ctf18-RFC によるPCNA装着を介した合成再開反応の連係機構の解析を行った。
またPCNA脱着を行うと言われているもう一つのRFC類似複合体、ヒトElg1-RFCを精製した。これを使いPCNA脱着反応の再構築を行い、精製タンパク質で脱着の再現が可能であることを示した。以上により複製時のPCNAの装着からその後の適時的なPCNAの脱着を連続的に解析することが可能となった。
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| Research Progress Status |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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