2018 Fiscal Year Annual Research Report
Structural studies on proteins involved in template switching pathway
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16H04755
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| Research Institution | University of Shizuoka |
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Principal Investigator |
橋本 博 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (40336590)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
原 幸大 静岡県立大学, 薬学部, 講師 (80729343)
菱木 麻美 静岡県立大学, 薬学部, 助教 (60571172)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 構造生物学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
テンプレートスイッチに関わるヒト由来DNAヘリケース(HLTF、ZRANB3、PARI)の構造生物学的研究を行った。平成29年度はPARIを高純度に精製することができたが、結晶化には至らなかった。そこで平成30年度は、PARIの大量調製と結晶化に注力した。精製方法の検討と結晶化スクリーニングを繰り返し行った結果、塩を主要な沈殿剤として用いた条件で50ミクロン程度の結晶を得ることに成功した。つくば高エネルギー加速器研究機構フォトンファクトリーのビームラインBL-17Aにおいて、3.2 Å分解能のX線回折回折強度データを収集した。晶系は正方晶系、格子定数はa = b = 68 Å、c = 85 Åであった。既知のDNAヘリケースの構造を利用した分子置換法による構造解析を試みたが、解釈可能な電子密度を与える解を得ることはできなかった。現在は、より高分解能な回折データを収集するために、結晶化条件の最適化を行うとともに、同型置換法・異常分散法による構造解析のための試料調製と結晶化を進めている。また、メチル化処理を行った試料においても粗結晶が得られ、現在、結晶の品質を改善するために結晶化条件の検討を進めている。PARIの結晶化に成功し、回折強度データを収集できたことは、PARIの構造解析に向けた大きな進展である。また、HLTFのDNA結合ドメインであるHIRANドメインと相補的二本鎖DNAとの複合体の構造精密化を完了した（2.1 Å分解能、R/Rfree = 0.229/0.261）。この構造はHIRANドメインがテンプレートスイッチにおける鎖交換に重要な働きを担うことを示唆するものであり、現在、学会発表および原著論文の投稿準備中である。
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| Research Progress Status |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Presentation] The dimerization domain of the hypertrophy-responsive transcription factor GATA4 is a therapeutic target for heart failure2018
Author(s)
Satoshi Shimizu, Kodai Hara, Yoichi Sunagawa, Asami Hishiki, Masafumi Funamoto, Yusuke Miyazaki, Yasufumi Katanasaka, Hiromichi Wada, Koji Hasegawa, Hiroshi Hashimoto, Tatsuya Morimoto
Organizer
第82回日本循環器学会学術集会
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[Presentation] GATA4 acetylation site is important for development cardiomyocyte hypertrophy2018
Author(s)
Satoshi Shimizu, Kodai Hara, Yoichi Sunagawa, Asami Hishiki, Masafumi Funamoto, Sari Nurmila, Kana Shimizu, Yusuke Miyazaki, Yasufumi Katanasaka, Hiromichi Wada, Koji Hasegawa, Hiroshi Hashimoto, Tatsuya Morimoto
Organizer
23rd Annual Scientific Meeting of the International Society of Cardiovascular Pharmacotherapy
Int'l Joint Research
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[Presentation] Determination and crystallization of GATA4 dimerization domain2018
Author(s)
Satoshi Shimizu, Kodai Hara, Yoichi Sunagawa, Asami Hishiki, Yusuke Miyazaki, Yasufumi Katanasaka, Masafumi Funamoto, Sari Nurmila, Kana Shimizu, Hiromichi Wada, Koji Hasegawa, Hiroshi Hashimoto, Tatsuya Morimoto
Organizer
IUBMB Focused Meeting on GATA Transcription Factors
Int'l Joint Research
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[Presentation] Inhibition of GATA4 Dimerization Suppresses Cardiac Hypertrophic Responses2018
Author(s)
Satoshi Shimizu, Yoichi Sunagawa, Kodai Hara, Asami Hishiki, Yusuke Miyazaki, Yasufumi Katanasaka, Masafumi Funamoto, Nurmila Sari, Kana Shimizu, Hiromichi Wada, Koji Hasegawa, Hiroshi Hashimoto, Tatsuya Morimoto
Organizer
AHA Scientific Session 2018
Int'l Joint Research
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[Presentation] Inhibition of GATA4 dimerization is a novel target for heart failure therapy2018
Author(s)
Satoshi Shimizu, Yoichi Sunagawa, Kodai Hara, Asami Hishiki, Yusuke Miyazaki, Yasufumi Katanasaka, Masafumi Funamoto, Nurmila Sari, Kana Shimizu, Hiromichi Wada, Koji Hasegawa, Hiroshi Hashimoto, Tatsuya Morimoto
Organizer
The 4th International Conference on Pharma-Food (ICPF 2018)
Int'l Joint Research
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[Presentation] The acetylation site of GATA4 have an important role for GATA4 dimerization and cardiomyocyte hypertrophy2018
Author(s)
Satoshi Shimizu, Yoichi Sunagawa, Kodai Hara, Asami Hishiki, Yusuke Miyazaki, Yasufumi Katanasaka, Masafumi Funamoto, Nurmila Sari, Kana Shimizu, Hiromichi Wada, Koji Hasegawa, Hiroshi Hashimoto, Tatsuya Morimoto
Organizer
第23回 静岡健康・長寿学術フォーラム
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[Presentation] Inhibition of GATA4 Dimerization Suppresses Cardiac Hypertrophic Responses2018
Author(s)
Satoshi Shimizu, Yoichi Sunagawa, Kodai Hara, Asami Hishiki, Yusuke Miyazaki, Yasufumi Katanasaka, Masafumi Funamoto, Nurmila Sari, Kana Shimizu, Hiromichi Wada, Koji Hasegawa, Hiroshi Hashimoto, Tatsuya Morimoto
Organizer
日本循環器学会第152回東海・第137回北陸合同地方会
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