2020 Fiscal Year Annual Research Report
植物RNAウイルスの輸送ハブ形成過程と細胞間移行機構の解明
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16H04882
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| Research Institution | Setsunan University |
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Principal Investigator |
海道 真典 摂南大学, 農学部, 准教授 (20314247)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
竹田 篤史 立命館大学, 生命科学部, 教授 (60560779)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | RNAウイルス / 複製複合体 / 移行タンパク質 / 小胞体膜 / 細胞内輸送システム |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Red clover necrotic mosaic virus（RCNMV)感染Nicotiana benthamiana植物の細胞中でRCNMV移行タンパク質と相互作用する因子として免疫沈降法によってAngustifolia (AN)タンパク質が単離されていた。この遺伝子配列の断片を含むヘアピン型RNAを発現するバイナリーベクターを作製し、Agrobacteriumに導入し、N. benthamiana植物を形質転換し、AN遺伝子のサイレンシング系統の作出を試みた。
AN遺伝子断片を導入した形質転換植物は2系統得られた。これらには表現型は無く野生型植物と同じであった。これらの形質転換植物におけるANのmRNA蓄積レベルをReal Time RT PCRによって調査したところ、コントロールのベクター形質転換植物におけるmRNA蓄積レベルと比較して、1系統は15％、もう1系統は約70％程度に低下していることがわかった。以下、gsAN植物とする。
gsAN植物に、GFP遺伝子を導入した組み換えRCNMV（RCNMV-GFP）を接種したところ、幾つかの個体ではコントロール植物と比較して、GFP蛍光の広がりが増すことが分かった。AN遺伝子の全長cDNAをクローニングしてN. benthamiana植物に一過的に過剰発現させた後にRCNMV-GFPを接種するとGFP蛍光の広がりはコントロール植物における広がりよりも抑制されることがわかっており、AN遺伝子はRCNMVの増殖を抑制する働きを有する可能性があると考えられた。
AN過剰発現系統形質転換N.benthamiana植物と、さらに多数のgsAN系統の作出を進めており、合わせてANの細胞内局在やMPとの相互作用について今後調べる予定である。
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| Research Progress Status |
令和2年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和2年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Infectious in vitro transcripts from a cDNA clone of a Japanese gentian isolate of Sikte waterborne virus, which shows host-specific low-temperature-dependent replication2021
Author(s)
Koki Fujisaki, Chika Tateda, Yoshiko Abe, Johon J. A. Dominguez, Mari Iwai, Kazue Obara, Taiki Nakamura, Yasuya Iwadate, Masanori Kaido, Kazuyuki Mise
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Journal Title
Archives of Virology
Volume: 166
Pages: 1991-1997
DOI
Peer Reviewed
