2016 Fiscal Year Annual Research Report
EMF特異的ヘモグロビンレセプターから迫る転写翻訳制御機構解明と寄生適応基盤
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16H05025
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| Research Institution | Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine |
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Principal Investigator |
井上 昇 帯広畜産大学, その他部局等, 理事・副学長 (10271751)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
菅沼 啓輔 帯広畜産大学, 畜産学部, 特任助教 (60772184)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | 寄生虫 / トリパノソーマ / ヘモグロビンレセプター / 発育時期特異性 / 伝播阻止ワクチン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
トリパノソーマはヘムの生合成経路を欠損し，生存に必要なヘムは宿主からの取込みに依存している。そのためヘム源を取込むタンパク質はトリパノソーマ制御法の標的として有効であると考えられる。本研究課題でトリパノソーマの媒介節足動物体内ステージ原虫(EMF)で発現・機能する遊離型ヘモグロビンレセプター(TcEpHbR)を同定し，海外学術雑誌にて報告した(Yamasaki et al., Parasites & Vectors, 2016)。TcEpHbRの伝播阻止ワクチン標的としての可能性を検討するため，TcEpHbRに対するモノクローナル抗体(mAb)を作製し，EMFに対する増殖阻害効果の解析及びmAbの性状解析を行った。TcEpHbRに対するmAbを作製し，EMFに対する反応性を間接蛍光抗体法(IFA)で確認した。またELISAでmAbのエピトープ探索を試みた。さらにmAb添加培養実験により，EMFに対する増殖阻害効果及びヘモグロビン(Hb)取込み阻害効果を解析した。IFAの結果，EMFに対して反応性のあるmAbが1クローン(mAb-1)得られた。ELISAの結果，mAb-1は150アミノ酸残基(AA)以下の組換えTcEpHbRには反応しなかったが，200AAから完全長の組換えTcEpHbRには反応した。またmAb-1処置はEMFの細胞膨張を特徴とする細胞変性と増殖阻害効果を引き起こしたが、EMFのHb取込みは阻害しなかった。ELISAの結果，mAb-1は立体構造認識抗体であることが明らかとなり、エピトープはTcEpHbRのN末端から50から200AAの領域に存在することが示唆された。また，mAb-1はEMFのHb取込みを阻害しなかったが，顕著なEMF増殖阻害効果を示した。このことからTcEpHbRはHbの取込みに加えて細胞増殖に関わる未知の機能を有する可能性が考えられた。
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| Research Progress Status |
翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
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[Journal Article] Characterization of an epimastigote-stage-specific hemoglobin receptor of Trypanosoma congolense2016
Author(s)
Yamasaki, S., Suganuma, K., Yamaghishi, J., Asada, M., Yokoyama, N., Kawazu, S., Inoue, N.
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Journal Title
Parasites & Vectors
Volume: 9
Pages: 299
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] A PCR based survey of animal African trypanosomes and selected piroplasm parasites of cattle and goats in Zambia2016
Author(s)
Musinguzi, S.P., Suganuma, K., Asada, M., Laohasinnarong, D., Thillaiampalam, S., Yokoyama, N., Namangala, B., Sugimoto, C., Suzuki, Y., Xuan, X., Inoue, N.
Organizer
第159回日本獣医学会学術集会
Place of Presentation
日本大学生物資源科学部（神奈川県藤沢市）
Year and Date
2016-09-06 – 2016-09-07
