2018 Fiscal Year Annual Research Report
Development of anti-miRNA oligonucleotides on the basis of structure control.
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16H05106
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| Research Institution | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology |
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Principal Investigator |
小松 康雄 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 副研究部門長 (30271670)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
周東 智 北海道大学, 薬学研究院, 教授 (70241346)
平野 悠 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 主任研究員 (70415735)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | microRNA / アンチセンス / RNA / oligonucleotide / oligonucleotide therapy |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々は独自の手法で2本鎖の糖部をクロスリンクして1本鎖への解離を抑制した構造（CL2本鎖）を有するanti-microRNA oligonucleotide（CL-AMO）を用い、主に以下の2課題について研究を進めた。
１）CL-AMOによる乳がん細胞の増殖抑制
アンチセンス鎖の両末端にCL2本鎖を有するmiR-21を標的としたCL-AMO を乳がん細胞に投与したところ、従来の1本鎖型AMOの1/10以下の濃度でCL-AMOは細胞増殖を抑制すること、またCL-AMO投与細胞ではがん抑制遺伝子の発現が上昇することを明らかにした。続いて、乳がん細胞ではこれまで標的として検討されていなかったmiR-148aに対するCL-AMOを合成して乳がん細胞へ投与し10日後までの細胞増殖能を調べた。その結果、1本鎖型AMOでは細胞増殖抑制効果が見られなかったのに対し、CL-AMOでは乳がん細胞の増殖を抑制することを確認した。また、CL-AMOを投与した細胞群のmRNAをマイクロアレイ解析したところ、これまで乳がんでは報告されていなかった遺伝子がmiR-148aの候補遺伝子となる可能性が示され、現在、詳細を解析中である。
２）CL2本鎖含有AMOおよび1本鎖型AMOの細胞内動態
これまでに引き続き、蛍光標識したCL-AMOおよび1本鎖型AMOの細胞内動態を解析した。特に3'末端側にCL2本鎖を有するAMO（3'CL）が核内に移行する現象を詳細に着目した。核および細胞質の蛍光強度比とノーザンブロットの分析等より、3'CLは細胞質内で分解された後に核内移行した可能性があることを確認した。そこで3'CLの5'末端に化学修飾基を導入して核酸分解酵素に対する耐性を上げた結果、3'CLも細胞質に残存することを見出した。現在、CL2本鎖と核酸分解酵素耐性がAMOの細胞内局在に与える効果をさらに詳細に分析中である。
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| Research Progress Status |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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