生殖とエクソソーム：卵成熟、受精、胚発生、着床におけるクロストーク機構の解明

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16H05475
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 浜谷 敏生 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 講師 (60265882)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮戸 健二 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 細胞医療研究部, 室長 (60324844) ; 阿久津 英憲 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 生殖医療研究部, 部長 (50347225) ; 山田 満稔 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 助教 (40383864)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: エクソソーム / miRNA / 卵胞 / 胚盤胞 / 子宮内膜 / 培養液

Outline of Annual Research Achievements

顕微授精後に1個の受精卵をsingle step mediumの30-ul dropに入れ、5日間培養液は交換せずに胚盤胞期まで培養して形態良好胚盤胞（Veeck分類3BB以上）が得られた場合に、使用済み培養液を回収し、胚それぞれについて凍結保存した（~25 ul）。胚を入れずに同様に培養したコントロール培養液も凍結保存した。RNA-seqによりmiRNA網羅的解析を行った結果、胚を入れた培養液では、胚を入れないコントロール培養液に比べて多数のmiRNAの濃度が有意に高かった。このことから、胚から放出されるmiRNAが多数存在することが明らかとなった（e.g. has-let-7b, 7c, 7f, 7i, has-mir-181a, 181b, 182, 192, 21, 202, 28, 302a, 30e, 371a, 373, 423, 509, 512, 873, 92a, 92b）。さらに、顕微授精後に胚盤胞培養した胚の使用済み培養液を胚それぞれについて凍結保存した。形態良好胚を胚移植し妊娠に至った胚が由来する培養液群と非妊娠胚の培養液群との間で、miRNAプロファイルを比較したところ、それぞれの群で特異的に発現するmiRNAが抽出された。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

倫理委員会の承認、臨床サンプルの収集と保存方法の確定、さらに臨床経過を追跡しその後の妊娠の有無の検討などに時間を要したため

Strategy for Future Research Activity

採卵時に回収される卵胞吸引液を卵胞それぞれについて凍結保存し、胚移植後の妊娠の有無を追跡している。卵胞液中のエクソソーム内のmiRNA網羅的解析およびタンパク質プロファイリングは2018年度には開始する予定である。
着床期のヒト子宮内腔洗浄液については、採取方法に関して検討を加えた。サイトコレクトでは十分な子宮内腔液を採取することが難しかったため、気管吸引チューブを子宮腔に挿入し、生理食塩水5mlで洗浄、回収した。反復着床不全症例に対して、子宮内腔液を凍結保存するとともに、その後の臨床経過を追跡している。子宮内腔液の採取後、無治療で胚移植後に臨床妊娠に至った群、子宮内腔液の採取あるいは子宮鏡にて慢性子宮内膜炎が疑われ、抗生剤・抗炎症薬が投与された群、さらに、治療後に再び子宮内腔液が採取されたが、胚移植後に臨床妊娠に至った群に分類している。

Research Products

• [Journal Article] Ubiquitin-activating enzyme E1 inhibitor PYR-41 retards sperm enlargement after fusion to the egg. (2018)
  • Author(s): Yoshida K, Kang W, Nakamura A, Kawano N, Hanai M, Miyado M, Miyamoto Y, Iwai M, Hamatani T, Saito H, Miyado K, Umezawa A
  • Journal Title: Reprod Toxicol. Volume: 76 Pages: 71-77
  • DOI: 10.1016/j.reprotox.2018.01.001.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Clinical efficacy of a combination of Percoll continuous density gradient and swim-up techniques for semen processing in HIV-1 serodiscordant couples. (2017)
  • Author(s): Inoue O, Kuji N, Ito H, Yamada M, Hamatani T, Oyadomari A, Kato S, Hanabusa H, Isaka K, Tanaka M.
  • Journal Title: Asian J Androl Volume: 19(2) Pages: 208-213
  • DOI: 10.4103/1008-682X.173442.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] 不妊治療における慢性炎症と着床不全 (2017)
  • Author(s): 吉井 紀子, 浜谷 敏生．産婦人科領域と炎症（青木大輔編著）
  • Journal Title: 別冊Bio Clinica:慢性炎症と疾患 Volume: 6(4) Pages: 78-83
• [Presentation] 胚性遺伝子KzpiはDifferentially methylated regionsにおけるメチル化を保護して胚発生に寄与する． (2017)
  • Author(s): 上條 慎太郎, 浜谷 敏生, 山田 満稔, 小川 誠司, 阿久津 英憲, 秦 健一郎, 田中 守, 青木 大輔
  • Organizer: 第69回日本産科婦人科学会学術講演会
• [Presentation] 卵子加齢機構の探索と臨床への示唆．シンポジウム「卵子の成熟と老化 －最新知見－ (2017)
  • Author(s): 浜谷敏生
  • Organizer: 第35回日本受精着床学会総会・学術講演会