• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to project page

2016 Fiscal Year Annual Research Report

DNA複製におけるポリメラーゼ群の協調的機能のゲノム科学的解析

Research Project

Project/Area Number 16H06151
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

大学 保一  東北大学, 学際科学フロンティア研究所, 助教 (80619875)

Project Period (FY) 2016-04-01 – 2020-03-31
KeywordsDNA複製 / DNAポリメラーゼ
Outline of Annual Research Achievements

平成28年度においては,ゲノムを網羅して誤りがちなDNAポリメラーゼPolζの機能を解析するために必要な酵母株の作成をおこなった.ポリメラーゼ活性部位を変異させリボヌクレオチドを高頻度で取り込むポリメラーゼをデザインし,細胞内で発現させ,対象となるポリメラーゼによる合成をリボヌクレオチドでマークする必要がある.PolζはPolε,Polδと同様にB-family DNA polymeraseに属する.先行研究で構築されたリボヌクレオチドを取り込む変異Polε,Polδの配列情報をもとにPolζの変異を導入するべき位置を同定し,変異体を作成した.その結果,作成した変異PolζがDNAポリメラーゼの機能を維持していることが確かめられ,変異PolζによるゲノムDNA中へのリボヌクレオチドの取り込みを観察することができた.この変異Polζ株で,ゲノムを網羅してリボヌクレオチド取り込みを解析した結果,PolζよりDNA複製への関与する確率が高まるゲノム領域を同定することができた.同時に,様々な複製機能に関わる変異体等でのPolζ機能解析から,Polζを制御する仕組みが明らかになるつつある.

同時に,1細胞を対象としたDNAポリメラーゼ機能解析を実現へ向けた準備を行った.第一にリボヌクレオチド取り込み部位解析時に作成する次世代シークエンサー解析用のライブラリDNAを1細胞由来から作成する必要がある.本年度は繰越期間を含めて,酵母株より,全ゲノム増幅の方法の最適化を行った.

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

現在までのところ,計画を行っていた通り,DNAポリメラーゼPolζの機能解析が進展し,誤りがちなDNAポリメラーゼがDNA複製に関与する仕組みを解明する上で非常に有用なデータが得られている.1細胞を対象とした機能解析は段階的に進行している状況である.

Strategy for Future Research Activity

今後は,次年度以降の計画にある通り,酵母に加えて,線虫,および,ヒト培養細胞を使用して,ゲノムを網羅したDNAポリメラーゼ機能の解析を行う.これらを材料を使用することにより,細胞の老化やがん化に伴って起きるDNA複製機構の変化の解明に向けた重要な実験データが得らえると期待される.同時に,比較的ゲノムDNAの大きな生物,細胞を使用することにより,1細胞を対象とした実験において,ゲノムDNAの増幅がより容易に行えると考えられる.

  • Research Products

    (3 results)

All 2017 2016

All Journal Article (1 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 1 results,  Open Access: 1 results) Presentation (2 results) (of which Invited: 2 results)

  • [Journal Article] PCNA ubiquitylation ensures timely completion of unperturbed DNA replication in fission yeast2017

    • Author(s)
      Daigaku Yasukazu、Etheridge Thomas J.、Nakazawa Yuka、Nakayama Mayumi、Watson Adam T.、Miyabe Izumi、Ogi Tomoo、Osborne Mark A.、Carr Antony M.
    • Journal Title

      PLOS Genetics

      Volume: 13 Pages: e1006789

    • DOI

      https://doi.org/10.1371/journal.pgen.1006789

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Presentation] 複製クランプのユビキチ化によるDNA複製機構の メンテナス2016

    • Author(s)
      大学保一
    • Organizer
      日本遺伝学会第88回大会 プレナリーワークショップ
    • Invited
  • [Presentation] 複製クランプPCNAの分子修飾のゲノム複製における役割2016

    • Author(s)
      大学保一
    • Organizer
      第39回日本分子生物学会年会
    • Invited

URL: 

Published: 2018-12-17  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi