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2017 Fiscal Year Annual Research Report

Elucidation of the mechanism in organ-specific reguation of thyroid hormone deiodinase

Research Project

Project/Area Number 16H06902
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

坂根 依利子  京都大学, 医学研究科, 特定助教 (70781342)

Project Period (FY) 2016-08-26 – 2018-03-31
Keywords甲状腺ホルモン脱ヨード酵素 / 甲状腺ホルモン
Outline of Annual Research Achievements

本年度においては、これまでに得た知見を活かして検討を進め、(1)肝臓において多く発現する核内受容体であるLXRαはヒト甲状腺ホルモン脱ヨード酵素1型(D1)の転写調節を行い、プロモーター領域におけるLXRαの結合部位では、甲状腺ホルモン受容体とのクロストークが行われていること、(2)成長ホルモンが甲状腺ホルモン血中濃度を調節しており、各種細胞株に対する投与実験を行ったところ、甲状腺由来細胞株においてのみヒト甲状腺ホルモン脱ヨード酵素2型(D2)が増加することを明らかにすることができ、論文報告した。
また、新規の調節因子の探索のために、化合物ライブラリーによるスクリーニングを開始した。甲状腺ホルモン脱ヨード酵素の領域では、性能の良い特異抗体がなく、酵素活性の測定もラジオアイソトープやカラム処理を要するなど、ハイスループットな検出が困難であった。そこで、プロモーターアッセイを応用した新たな検出系を構築した。具体的には、ヒト甲状腺ホルモン脱ヨード酵素のプロモーターをクローニングし、下流にレポーターとして高い発光強度と安定性を有するNanoluc®ルシフェラーゼを用い、384ウェルプレートと少ない試薬量で十分に検出できる、ランニングコストと安定性に優れた系である。トランスフェクション効率が高いヒト由来細胞株であるHEK293Tを用い、細胞播種・化合物分注などいずれの工程においても種々の分注器を使用し、誤差を可能な限り小さくした。本年度に既にヒトD2のスクリーニングは終了しており、再現性・濃度依存性を確認し、複数のヒット化合物を得た。今回使用したのは臨床応用されている薬剤のライブラリーであり、各化合物についての基礎・臨床の豊富な知見を活かして、現在メカニズムの解析を開始している。

Research Progress Status

29年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

29年度が最終年度であるため、記入しない。

  • Research Products

    (2 results)

All 2017

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 2 results)

  • [Journal Article] Regulation of type 1 iodothyronine deiodinase by LXRα2017

    • Author(s)
      Sakane Yoriko、Kanamoto Naotetsu、Yamauchi Ichiro、Tagami Tetsuya、Morita Yusuke、Miura Masako、Sone Masakatsu、Yasoda Akihiro、Kimura Takeshi、Nakao Kazuwa、Inagaki Nobuya
    • Journal Title

      PLOS ONE

      Volume: 12 Pages: 179213~179213

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0179213

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Effects of growth hormone on thyroid function are mediated by type 2 iodothyronine deiodinase in humans2017

    • Author(s)
      Yamauchi Ichiro、Sakane Yoriko、Yamashita Takafumi、Hirota Keisho、Ueda Yohei、Kanai Yugo、Yamashita Yui、Kondo Eri、Fujii Toshihito、Taura Daisuke、Sone Masakatsu、Yasoda Akihiro、Inagaki Nobuya
    • Journal Title

      Endocrine

      Volume: 59 Pages: 353~363

    • DOI

      10.1007/s12020-017-1495-y

    • Peer Reviewed / Open Access

URL: 

Published: 2018-12-17  

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