2017 Fiscal Year Annual Research Report

Analysis of the translocation mechanism of CKAP4 to exosome

Research Project

Project/Area Number	16H06944
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	木村公一大阪大学, 医学系研究科, 特任助教(常勤) (60595370)
Project Period (FY)	2016-08-26 – 2018-03-31
Keywords	エクソソーム / CKAP4 / DKK1 / Clathrin
Outline of Annual Research Achievements	細胞膜上に発現するCKAP4のエクソソームへの移行にClathrinおよびDKK1依存性のエンドサイトーシスが関与するか否かを解析した。膵がん細胞株S2-CP8細胞（細胞膜上およびエクソソーム中にCKAP4が高発現し、かつDKK1が高発現）において、Clathrin の発現抑制により、細胞膜上のCKAP4の発現は増加し、エクソソーム中のCKAP4の発現が低下した。また、Clathrin依存性エンドサイトーシス阻害剤であるmonodansylcadaverine(MDC)処理でも同様の結果となった。さらにS2-CP8細胞において野生株（以下WT）、DKK1ノックアウト(KO)株（以下DKK1 KO）、DKK1 KO株にDKK1を発現させた株（以下DKK1 KO/DKK1）、DKK1 KO株にCKAP4への結合に必要なドメインCRD1を欠損したDKK1を発現させた株（以下DKK1 KO/DKK1-ΔCRD1）におけるエクソソーム中のCKAP4の発現量を比較した。WTに比較して、DKK1 KOではエクソソーム中CKAP4の発現は減少し、DKK1 KO/DKK1では回復した。一方で、DKK1 KO/DKK1-ΔCRD1では発現量は回復しなかった。さらに、イヌ腎尿細管上皮細胞株MDCK細胞（細胞膜上にCKAP4が発現しているが、S2-CP8細胞に比べエクソソーム中CKAP4は低発現かつDKK1低発現）の野生株、DKK1過剰発現株、DKK1-ΔCRD1過剰発現株で、エクソソーム中CKAP4の発現量を比較した。野生株に比べて、DKK1過剰発現株で発現が増加し、DKK1-ΔCRD1過剰発現株では増加を認めなかった。以上の結果から、細胞膜上に発現するCKAP4のエクソソームへの移行に、DKK1依存性ならびにClathrin依存性のエンドサイトーシスが関与していることが明らかとなった。
Research Progress Status	29年度が最終年度であるため、記入しない。
Strategy for Future Research Activity	29年度が最終年度であるため、記入しない。