Utility of exosomal RNA in liquid biopsy for oral cancer

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16H07027
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 浜川 知大 愛媛大学, 医学系研究科, 講師 (60723848)
• Project Period (FY): 2016-08-26 – 2018-03-31
• Keywords: Exsome / RNA / 遺伝子変異

Outline of Annual Research Achievements

前年度に続き、口腔扁平上皮癌由来exosomal RNA検出の有用性を検討した。口腔扁平上皮癌細胞由来のexosomal RNAから遺伝子変異の検出は可能であったが、患者血清から遺伝子変異を検出するにはリアルタイム定量化PCRでは検出感度に問題があるため、デジタルPCR法で遺伝子変異の検出が可能か検討した。
口腔扁平上皮癌由来の GFP-SAS細胞、KT-T細胞、KT-N細胞を使用した。KT-T細胞およびKT-N細胞ではPIK3CA H1407Rの遺伝子変異を認め、KT-N細胞ではHRAS Q61Rの変異を認めている。実験にはQuantStudioTM 3D Digital PCR systemおよびQuantStudioTM 3D AnalysisSuiteTM (Thermo Fisher Scientific)、PIK3CA H1407RおよびHRAS Q61Rに特異的なTaqManプローブプライマーを使用した。その結果、GFP-SAS細胞由来のExosomal RNAからはPIK3CAおよびHRASの遺伝子変異は認めず、KT-T細胞由来のExosomal RNAからはPIK3CA、KT-N細胞由来のExosomal RNAからはPIK3CAおよびHRASの遺伝子変異を認めた。
口腔扁平上皮癌患者の癌組織からgenomic DNAを抽出し、次世代シーケンサーで遺伝子変異解析を行った。TP-53の遺伝子変異を複数例認めたが、PIK3CAやHRASの遺伝子変異などOncogenicな遺伝子変異を認める症例はほとんどなく、血清Exosomal RNAからの遺伝子変異検出の検討は行えなかった。
口腔扁平上皮癌細胞由来のExosomal RNAからの遺伝子変異の検出は可能であり、今後は患者由来血清Exosomal RNAからの遺伝子変異検出についても検討を行っていく予定である。

Research Progress Status

29年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

29年度が最終年度であるため、記入しない。