2016 Fiscal Year Annual Research Report
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16J04984
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
川﨑 健太 慶應義塾大学, 医学研究科, 特別研究員(DC2)
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| Project Period (FY) |
2016-04-22 – 2018-03-31
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| Keywords | オルガノイド / リプログラミング / 大腸癌 / エピジェネティック |
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| Outline of Annual Research Achievements |
オルガノイドという体外での上皮培養技術の確立ならびにCRISPR/Cas9のゲノム編集技術はより精巧な疾患モデルの作成という観点で著しい進歩を示した. その2つの技術を用いて, 大腸癌の発癌機構の解明に取り組んでいる。大腸癌の発癌機構は大腸正常上皮に遺伝子変異が順に入るadenoma-carcinoma sequenceが提唱されている。その仮説に基づき、我々の研究室でも5つの主要遺伝子変異を正常大腸上皮オルガノイドへ導入することで再現を試みた. しかし, 5つの変異をもっても人工大腸癌の作成には至らなかった. 本研究では, 主要遺伝子変異に続くエピジェネティックな変化が大腸上皮の悪性化には重要と考え, その変化を起こす転写因子の同定を試みた.
今年度は, 正常大腸上皮や大腸癌のアレイデータや染色体の異常のデータを用いることで悪性化のメカニズムに関わると想定される転写因子の抽出ならびにベクターの作成を行った. また、腺腫から癌へのエピジェネティックな変化のアッセイ系となる仮説をたて, レポーターシステムの作製を行った．
今後本アッセイ系に転写因子を導入することで, 大腸癌へのリプログラミングを起こす転写因子の解明を行う.
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
今年度は当初計画されていたin vitroの系での検討ならびにアッセイ系の作成を行った. 該当する転写因子の抽出, その転写因子の作成ならびにリプログラミングによる悪性化の指標となりうるレポーターの作成は今後のin vivoのマウスでの動物移植アッセイへつながるステップの達成と考えられる.
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は全ての転写因子を導入したオルガノイドを作成し, マウスに移植, 肝転移の出現ならびに遺伝子発現の変化に関して解析する. 具体的にはそれぞれの転移巣より細胞を抽出し, オルガノイドを個々に作製, 次世代シークエンスやマイクロアレイ, Primary Component Analysisで共通する因子の検索を行う. 転移が認められない場合には同定した因子以外の可能性の検討や転写因子以外の要素に関する検討が必要と考えられる.
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Research Products
(1 results)
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[Journal Article] A Colorectal Tumor Organoid Library Demonstrates Progressive Loss of Niche Factor Requirements during Tumorigenesis.2016
Author(s)
Fujii M, Shimokawa M, Date S, Takano A, Matano M, Nanki K, Ohta Y, Toshimitsu K, Nakazato Y, Kawasaki K, Uraoka T, Watanabe T, Kanai T, Sato T.
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Journal Title
Cell Stem Cell
Volume: 18
Pages: 827-38
DOI
Peer Reviewed
