ハマナス花弁ポリフェノールによるアテローム性動脈硬化症予防作用

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K00843
• Research Institution: Kitami Institute of Technology
• Principal Investigator: 新井 博文 北見工業大学, 工学部, 准教授 (70295848)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 福永 健治 関西大学, 化学生命工学部, 教授 (30278634)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: ハマナス / ポリフェノール / テリマグランジン / 活性酸素 / 酸化ストレス / 低密度リポタンパク質 / アテローム性動脈硬化症 / 動物実験

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は、アテローム性動脈硬化症に関与する生体酸化ストレスに対するハマナス花弁ポリフェノールの効果をin vitroおよびin vivoで明らかにすることである。平成29年度は、１）アテローム性動脈硬化症の一原因である低密度リポタンパク質（LDL）の活性窒素種（RNS）による脂質過酸化反応に対するハマナス花弁ポリフェノールの効果、２）LDLの脂質過酸化反応に伴って引き起こされるアポリポタンパク質B-100（apoB-100）の酸化修飾に対するハマナス花弁ポリフェノールの効果、３）ハマナス花弁ポリフェノールによるマクロファージの酸化LDL貪食抑制作用について検討した。
１）テリマグランジンIの存在下でLDLを活性窒素種であるペルオキシナイトライト発生試薬（SIN-1）と37℃、pH7.4でインキュベートし、LDLの酸化を誘導した。脂質過酸化の指標として、生成するコレステロールエステルヒドロペルオキシド（CE-OOH）をHPLC/UVで測定した。その結果、テリマグランジンIは濃度依存的にCE-OOHの生成を抑制した。
２）テリマグランジンIの存在下でLDLを活性酸素種（ROS）およびRNSで酸化し、生成するapoB-100酸化修飾物をウエスタン解析した。その結果、テリマグランジンIはROSおよびRNSによるapoB-100の酸化修飾を抑制した。これらの結果より、テリマグランジンIは、ROSおよびRNSによるLDL酸化抑制に有効であることが示唆された。
３）ROSおよびRNSで酸化したLDLを蛍光標識した。これをマウスマクロファージ細胞株（RAW264.7）とインキュベートし、蛍光顕微鏡観察した。その結果、非特異的な取り込みが認められ改善の余地が無いと判断されたため、今後はヒトマクロファージ（THP-1）を用いて研究を進めることとした。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

平成29年度の当初計画における目標は、LDLの脂質およびタンパク質酸化に対するハマナス花弁ポリフェノールの抑制作用（後半）および マクロファージの酸化LDL貪食に対するハマナス花弁ポリフェノールの抑制作用（前半）であり、達成度は概ね順調であると判断した。

Strategy for Future Research Activity

平成30年度は、マクロファージによる酸化LDLの貪食に対するハマナス花弁ポリフェノールの効果について実験条件の再検討により調べるとともに、関西大学と共同でハマナス花弁ポリフェノールの高LDL血症マウス病態改善作用について調べる方針である。

Causes of Carryover

(理由) 　LDL調製および機器分析における消耗試薬・器具等のコストを工夫して節約できたため。
(使用計画)　マクロファージの新たな細胞株の購入、細胞分化に必要な試薬の購入、蛍光顕微鏡観察に必要な蛍光試薬キット等の購入に充てる予定である。

Research Products

• [Presentation] Effects of tellimagrandin I on oxidation of low-density lipoprotein (2017)
  • Author(s): Arai, H., Sekimoto, S., Mizuma, T., Saitoh, H., Sukhbold, E., Takasugi, M.
  • Organizer: International Conference on Polyphenols and Health
  • Int'l Joint Research