2017 Fiscal Year Research-status Report
色素上皮由来因子の機能的修飾ペプチドによる糖尿病腎症の新しい治療手段の開発
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16K07101
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Research Institution | Kurume University |
Principal Investigator |
松井 孝憲 久留米大学, 医学部, 講師 (10425233)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
東元 祐一郎 久留米大学, 医学部, 教授 (40352124)
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Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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Keywords | PEDF / 機能性ペプチド |
Outline of Annual Research Achievements |
全長のPEDFを3分割し, Hisタグを付加した組み換えフラグメントの発現プラスミドを作製し、大腸菌にて発現・精製をおこなった。各 フラグメント存在下で腎メサンギウム細胞をAGEで刺激した際の酸化ストレスレベル(細胞内活性酸素種)をROS検出試薬(Carboxy-H2DFF DA)により測定し, MCP-1,VCAM-1, PAI-1遺伝子の発現をreal-time PCR法により定量した。得られたフラグメントをさらに分割したペ プチドを作製したところ、ROS産生、遺伝子発現について効果が確認できなかった。そこで、全長のPEDFを分割する位置を変更し、再度組み換えフラグメントの発現プラスミドを作製し、フラグメントの発現・精製をおこなった。フラグメントについて、in vitroにおける機能解析をおこなった。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初の計画予定で得たフラグメントから得たペプチドにPEDFの機能を有するものが得られなかったため、フラグメントの作製から再度施行したため。
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Strategy for Future Research Activity |
再度作製したフラグメントを分割したペプチドを作製し、in vitroの解析を進める。
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Causes of Carryover |
(理由) 今年度の研究内容である、ペプチドを用いたin vitroアッセイにおいて、有効なペプチドが得られなかったため、続いて予定していたin vivoアッセイをおこなう必要がなくなり、再度作製したフラグメントは既に購入済みの試薬等を用いたため、一部の試薬等を購入しなかったため。 (使用計画) 新しく作製したフラグメント、ペプチドを用いてin vitroのアッセイをおこなう分として使用する。
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