Characterizetion of TFFI2, a novel diagnosis biomarker for ovarian cancer

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K07147
• Research Institution: National Institute of Health Sciences
• Principal Investigator: 荒川 憲昭 国立医薬品食品衛生研究所, 医薬安全科学部, 主任研究官 (60398394)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2020-03-31
• Keywords: 卵巣明細胞癌 / バイオマーカー / TFPI2 / 糖鎖 / LacdiNAc

Outline of Annual Research Achievements

我々が独自に注目している卵巣癌血清診断マーカー候補タンパク質TFPI2に関して、昨年度は、卵巣明細胞癌（OCCC）細胞株と胎盤絨毛栄養膜細胞から、ヘパリンで遊離するTFPI2の糖鎖を比較解析し、OCCC由来のTFPI2はLacdiNAc（LDN）構造を有する糖鎖が提示されている可能性を明らかにした。そこで、本年度、質量分析データの詳細な解析を行い、TFPI2 に存在する2箇所の糖鎖結合部位（Kuniz domain 2および3）に提示されているグリコフォームの分布を調べた。精密質量と質量間隔から糖ペプチドのプリカーサーイオンの価数と同じ価数のグリコフォームを探索した結果、各細胞から様々な質量のプレカーサーイオンが検出され、胎盤型TFPI2から検出される糖鎖のほとんどが、アンテナの両方にLacNAc (LN)を持つバイアンテナ型の複合型糖鎖、あるいは全てのアンテナにLNを持つトリアンテナ型の複合型糖鎖に分類することができたが、OCCC由来のTFPI2は、アンテナの一方にLDN、もしくは両方にLDNを持つバイアンテナ型の複合型糖鎖を提示しており、このような構造は胎盤型TFPI2からは検出されなかった。種々の糖転移酵素の遺伝子発現解析を行った結果、OCCCには、LDN糖鎖合成に関わる糖転移酵素、β1, 4-Nacetylgalactosaminyltransferase 3が特徴的に発現していることを明らかとなり、本酵素が卵巣明細胞癌におけるTFPI2の異常糖鎖構造の責任修飾酵素である可能性が考えられた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

TFPI2が有する2箇所の糖鎖結合部位に提示されるグリコフォーム群の分布について、卵巣癌由来のものと胎盤由来のものとで比較をし、両者のパターンが大きく異なることを明らかにした。また、その糖鎖構造の分布が異なる原因と考えられる糖転移酵素を明らかにした。研究は順調に進展していると考える。

Strategy for Future Research Activity

ヒト検体の解析、質量分析データ、および遺伝子発現解析について、必要に応じた再解析を行い、論文発表や学会発表の準備を進める。

Causes of Carryover

TFPI2糖鎖の質量分析データについて、パソコン上の解析に時間を要し、予定していた検体解析や国際学会の出席を来年度に変更したため。

検体解析に必要な試薬、器具、装置、論文発表や学会発表に必要となる英文高閲費用、国際学会への出席費用に当てる。