2018 Fiscal Year Annual Research Report
DNA recognition of eukaryotic CENP-TWSX complex
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16K07279
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| Research Institution | Tokyo University of Science |
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Principal Investigator |
西野 達哉 東京理科大学, 基礎工学部生物工学科, 准教授 (50533155)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 染色体分配 / キネトコア構成因子 / タンパク質複合体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
CENP-TWSX複合体は真核生物のセントロメア領域に細胞周期を問わず局在し、細胞分裂期には微小管結合タンパク質と結合することで染色体分配機構の正確性に寄与する。CENP-TWSX複合体はヒストンフォールドドメインを有し、DNAに結合する。CENP-TWSX複合体はヒストンと異なりDNA結合時に正の超らせんを導入することが知られているが、その詳細は不明である。さらにCENP-TWSX中のCENP-SXはDNA二重鎖切断修復に関与するFANCMと相互作用し機能するが、その結合様式がCENP-SX単独やCENP-TWSXとどのような差異があるかも不明である。
今年度は昨年に引き続き好熱性真核生物由来のCENP-TWSX複合体発現とFANCM-CENP-SX複合体とDNAの共結晶化を行なった。好熱性真核生物由来のCENP-TWSX複合体発現ではMBP(マルトース結合タンパク質)との融合タンパク質として発現した際に発現量と可溶性が向上し、複合体を精製することができた。一方、結晶化については使用する二重鎖DNAの長さや末端の形状(平滑／突出)を試したところ、突出末端を使用した際に結晶の回折能が向上した。分子置換法により位相決定を行ったところ、FANCMは結晶中に存在せず、CENP-SX複合体とDNAが結合していることがわかった。興味深いことに隣り合うCENP-SX複合体同士は特異的な相互作用により等間隔で配置されていた。このことは我々が以前ゲルシフト法によるDNA結合解析時に観察したラダー状の複合体を反映していると考えられる。今後は生化学的解析ならびに細胞生物学的解析を行い、CENP-SX複合体とDNAによって形成されるラダー状構造の意味を明らかにする予定である。
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Research Products
(7 results)
