2018 Fiscal Year Annual Research Report
Investigation of protein structure and signaling molecule in general stress response in Bacillus subtilis
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16K07287
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| Research Institution | Japan Synchrotron Radiation Research Institute |
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Principal Investigator |
熊坂 崇 公益財団法人高輝度光科学研究センター, タンパク質結晶解析推進室, 室長 (30291066)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | X線結晶解析 / 微生物 / ストレス応答 / シグナル伝達 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
今年度は以下のような研究を実施した。
1. 目的タンパク質の発現・精製: Rsbタンパク質群以外のタンパク質、特にObg, RplK, RplM, RelAについて、発現系の全面的な見直しを行い、再構築を実施した。その結果、いずれも大腸菌にて発現が確認され、アフィニティークロマトグラフィーとゲルろ過により高純度の試料を得ることができた。一部については十分な発現量が得られたため、結晶化条件の検索を進めたところ、結晶様物が析出している。引き続き構造解析を実施する。
2 & 3. 未知シグナル分子の同定および結晶化と構造解析: 昨年度に枯草菌RsbQの未知シグナル分子の同定について、結晶化と構造解析を同時に進め、細胞抽出物ならびに候補分子に対する結合構造の解明ができたが、抽出物の同定が未完であった。試料の調製を進め、共同研究により質量分析法による確認を試みたが、残念ながら同定には至らなかった。RsbQの結晶解析においては、GlycerolやEthylene Glycolの添加により結晶が不安定化する現象があるため、我々が開発しその有用性を本試料で示すことができたHAG法について並行して検討を進めており、今年度も種々の試料への適用が確認された。
4. 溶液散乱構造の解析:RsbPについて溶液散乱データの解析を共同研究により進めた。より散乱曲線にフィットしたモデルの構築ができたが、Coiled-coil領域がMD計算においてフレキシブルとなっており、モデリングの再検討が必要と考えている。
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