Roles of the interferon in temperature-dependent immunity of fish

2018 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16K07841
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 一色 正 三重大学, 生物資源学研究科, 教授 (30378319)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 水産学

Outline of Annual Research Achievements

本研究では，ヒラメParalichthys olivaceusのIFN関連遺伝子の発現に及ぼす水温の影響を推察するため，生体内でヒラメのリコンビナントIFN（rIFN）の発現を誘導するプラスミド（rIFNベクター）を構築するとともに，異なる水温で飼育したヒラメにrIFNベクターを接種し，IFN関連遺伝子であるI型IFNおよびMx遺伝子の発現解析を行った。
rIFN遺伝子は，ウイルス性出血性敗血症ウイルスを接種したヒラメからRT-PCRを行ってIFN遺伝子のcDNAを合成し，そのシーケンス解析を行うことにより得た。これを発現ベクタ－（pcDNA3.1）にライゲ－ションし，大腸菌に形質転換したのち，大腸菌のプラスミドを抽出・精製し，rIFNベクター（pcDNA3.1-JF-rIFN1）を構築した。ヒラメにpcDNA3.1-JF-rIFN1を15 ug/50 uL/尾ずつ筋肉内接種し，水温20℃および10℃でそれぞれ飼育する実験区を設けた。また，両温度についてpcDNA3.1あるいはPBSを用いて同様に処理する対照区を設けた。IFN関連遺伝子の発現は，各区から接種0，3，6，12，24，96時間後，3，5，7日後に3尾ずつを無作為に取り上げ，筋肉（注射部位）および頭腎を採材して核酸抽出後，リアルタイムPCRによる相対定量を行って解析した。
その結果，実験区におけるIFN関連遺伝子の発現量は20℃では3日後に増加し，その値が7日後まで維持されるが，10℃では7日後に増加する傾向が認められた。以上の結果から，水温はヒラメのIFN関連遺伝子の発現に影響を及ぼしていることが強く示唆された。また，構築したrIFNベクターは，ヒラメの免疫機構の解明に有用であると思われる。