2018 Fiscal Year Annual Research Report
Development of a TTR amyloidogenesis inhibitor based on the capture of transthyretin monomers
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16K08193
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| Research Institution | University of Toyama |
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Principal Investigator |
横山 武司 富山大学, 大学院医学薬学研究部(薬学), 助教 (50524162)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | トランスサイレチン / アミロイドーシス / PPI創薬 / アントラキノン / ジアセレイン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
トランスサイレチン（TTR）単量体に結合して、四量体会合を阻害する低分子化合物をイン・シリコスクリーニング（ドッキング・シミューレーション）および化合物ライブラリによるスクリーニングを行い、ジアセレインがTTR単量体に結合する可能性を示唆された。最終年度はジアセレインのTTRアミロイド線維化の仕組みを明らかにするために、①蛍光色素チオフラビンTを用いたアミロイド線維抑制実験、②グルタルアルデヒドを用いた化学架橋実験、③等温滴定型カロリーメトリー、④X線結晶構造解析を行った。その結果、①ジアセレインはTTR既存薬であるジフルニサルと同等の阻害活性を有する、②ジアセレインはTTR四量体よりもむしろTTR二量体・TTR単量体を安定化する、③ジアセレインは四量体TTR（野生型TTR）に解離定数6 µMで結合するが、二量体TTR（S112I変異体TTR）には結合しない。④ジアセレインは四量体TTRのT4結合部位に結合する。①と②の結果から、ジアセレインはTTR二量体または単量体を安定化することでTTRアミロイド線維化を阻害することが明らかにした。これは既存のTTR阻害薬とは異なるメカニズムである。一方で、比較的低い親和性で四量体に結合し、その立体構造を安定化することも明らかになった。等温滴定型カロリーメトリー実験で二量体TTRに結合しなかったという結果は、他の実験と矛盾しているが、比較的高いタンパク質濃度（50 μM）での実験であるため、この濃度におけるオリゴマー形成を検証する必要がある。また、ジアセレインの結合がエントロピー駆動型である場合、その結合を等温滴定型カロリーメトリーで検出するのは非常に困難なものになるため、小さい熱量変化を検出できるように実験条件を工夫する必要があるかもしれない。
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[Presentation] Virtual and high-throughput screenings identify novel TTR stabilizers for hereditary ATTR amyloidosis2018
Author(s)
5) Keisuke Chosa, Yukiko Teranishi, Ryoko Sasaki, Shun Takaki, Takeshi Yokoyama, Yoshiki Imai, Yuriko Wakita, Takashi Sato, Tsuyoshi Shuto, Mary Ann Suico, Mineyuki Mizuguchi, Hirofumi Kai
Organizer
The XVIth International Symposium on Amyloidosis
Int'l Joint Research
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