2017 Fiscal Year Research-status Report
高感度な核酸-蛋白質相互作用評価法の開発と核酸医薬への展開
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16K08218
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| Research Institution | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology |
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Principal Investigator |
三重 安弘 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 研究グループ長 (00415746)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | microRNA / Ago蛋白質 / anti-miRNAオリゴ / 電気化学アッセイ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
がん等の疾病に関与しているmicroRNA（miRNA）を標的とした核酸医薬が期待され、miRNA活性を阻害するオリゴ核酸，anti-miRNA oligonucleotide (AMO)，の開発が行われている。しかしながら、その作用機序の理解は進んでいない。本研究では、電極上に固定化したオリゴ核酸のダイナミクスを指標とすることで高感度な核酸-蛋白質相互作用評価法を開発し、これを応用してmiRNA-蛋白質複合体に対するAMOの作用機序を解明することを目的とする。
本年度（２年目）は、まずAgo蛋白質とmiRNAの反応（Ago・miRNA複合体生成）効率の向上を目指して、様々な条件下での検討を行い収率を２倍程度向上させることができた。また、検討過程において、miRNA結合によるAgo蛋白質の構造変化を示唆する新しい結果も得られ興味深いと考えている。しかしながら、前記反応効率は未だ十分ではなく網羅的解析に資する複合体試料取得には至っておらず、更なる改善が必要と考え、引き続き次年度も検討を予定している。一方、得られたAgo・miRNA複合体を用いて、昨年度に確立した手法で作製したオリゴ核酸固定化電極上での電気化学応答を種々条件にて評価したところ、最適条件下においてAgo・miRNA複合体の添加前後で、電気化学マーカーの電流応答が大きく変化した。また、Ago蛋白質（非複合体）を添加した場合、電流は変化しなかった。これらの結果から、オリゴ核酸（AMO）とAgo・miRNA複合体との相互作用を高感度に検出できることがわかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
Ago・miRNA複合体の調製反応の効率を2倍程度ではあるが向上させることができ、得られた試料を用いて、今年度に計画していた検討内容を進め次年度の計画実施に対して十分な成果・知見を得た。
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| Strategy for Future Research Activity |
ターゲット試料（Ago・miRNA）の大量調整法を確立し、今年度に得られた系を基盤とした高感度な核酸-蛋白質相互作用評価法を開発する。また、複数種のAMOを用いた解析を行いmiRNA-蛋白質複合体に対するAMOの作用機序に関する知見を得る。更に並行して、AMOを用いたがん細胞の増殖抑制効果の調査も進める。
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| Causes of Carryover |
（理由）結果の詳細な解析等に時間を要したため、予定していた学会発表等を行うことができなかった。また、目的の蛋白質・核酸複合体（Ago・miRNA）の収率が低いことから、これまでの方法を見直し、次年度に効率改善のための検討を実施することとした。
（使用計画）学会発表等の旅費や上述の蛋白質・核酸複合体調製における収率改善検討のための物品費に使用する。
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Research Products
(4 results)
