2017 Fiscal Year Research-status Report
分子生物学的手法を用いた動物由来生薬の基原生物鑑定法の構築
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16K08304
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
中西 宏明 順天堂大学, 医学部, 准教授 (90392274)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 動物基原生薬 / 16SrRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成29年度末までに18種類（阿膠、牛黄、熊胆、麝香、鹿茸、海狗腎、海馬、亀板、土鼈甲、烏賊骨、水牛角、五霊脂、蛤かい、牡蠣、石決明、竜骨、反鼻、蛇胆）30品目の生薬について分析を試みた。生薬は、すべて日本の漢方薬局やメーカーから、なるべく原型に近い形状のものを購入した。
DNA抽出は、生薬の性状に合わせて条件を変え、最終的にQIAamp DNA Mini Kitで精製した。抽出DNAについて16SrRNA領域をPCR増幅させ、BigDye Terminator v1.1 Sequencing Kitにてシークエンスし、BLAST解析により相同性検索を行った。結果として、ほとんどの生薬は、DNA抽出の際、QIAamp DNA Mini Kitの操作にTE飽和フェノール処理を加えるだけでDNAが抽出できた。また、海馬については抽出時にDTT処理を、亀板や土鼈甲、烏賊骨、水牛角、牡蠣といったカルシウムを多く含む生薬については、抽出前に脱灰処理を加えることによりDNAを抽出できた。石決明は、通常の脱灰処理を施してもDNA抽出されず、法医学分野でよく用いられるTBONEキットを用いたところ、DNA抽出できた。しかし、阿膠、一部の海馬および竜骨からは、DNAを抽出できなかった。DNAが抽出された生薬はすべて、16SrRNAの塩基配列を読むことで由来を決定できた。DNAが抽出できなかった生薬は、その製法（煮熟や漂白）が影響していたり、もともとDNAの含有量が少ないためと考えられた。
平成29年度末までの研究成果は、日本薬学会第138年会で発表した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成28年度末まではやや遅れ気味であったが、平成29年度中はまとまった時間を取ることができたため挽回できた。
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| Strategy for Future Research Activity |
節足動物が基原となっている生薬（虻虫、地竜、白僵蚕、桑ひょう蛸等）について、DNA抽出法と解析する遺伝子を決定し、基原の鑑定法を完成させる。
また、平成29年度末までの研究成果を論文にする予定である。
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| Causes of Carryover |
平成29年度で研究が大幅に進んだため予算を多く使用したが、平成28年度分の繰越金が多かったために、平成29年度も繰越金が発生した。しかしながら、節足動物を基原とした生薬の検討をまだ行っていないことから、繰越金と翌年度分として請求した助成金と合わせた予算で、研究を進めたいと考えている。
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