2019 Fiscal Year Annual Research Report
Development of innovative antibacterial drugs targeting bacterial tyrosine kinases
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16K08341
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
深澤 秀輔 国立感染症研究所, 品質保証・管理部, 主任研究官 (10218878)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2020-03-31
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| Keywords | チロシンキナーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
細菌には、真核生物のものとは相同性がなく、構造が全く異なるチロシンキナーゼが存在する。細菌型チロシンキナーゼの性質を調べるため、黄色ブドウ球菌チロシンキナーゼ触媒サブユニットCapB2と調節サブユニットCapA1に蛍光タンパクタグを付加し、HEK293T細胞に発現させた。単独発現ではCapA1は細胞膜、CapB2は細胞質に局在した。共発現させるとCapB2は細胞質から膜に移行、CapA1と局在が一致し、CapB2とCapA1の相互作用を可視化することができた。また相互作用により、CapB2のチロシンキナーゼ活性は亢進した。CapA1全長ではなくC末の細胞質領域のみでも、CapB2との相互作用が観察された。CapA1活性化領域に四量体を形成する蛍光タンパクタグ、CapB2に単量体蛍光タンパクタグを付加して共発現させるとCapB2のキナーゼ活性は著しく上昇した。チロシンリン酸化はCapA1とCapB2に付加した蛍光タンパクタグ、およびCapB2のC末チロシンクラスターに生じていることが確認された。チロシンクラスターを変異、欠失させてもタグ部分のリン酸化は検出されることから、CapB2のキナーゼ活性には自己リン酸化は必要ないことが判明した。その他、種々の変異体を作製し、キナーゼ活性、相互作用に関わる領域やアミノ酸残基を同定した。黄色ブドウ球菌以外にも、肺炎球菌、枯草菌のチロシンキナーゼ触媒サブユニットおよび調節サブユニット、さらにグラム陰性菌である大腸菌の一体型チロシンキナーゼをHEK293T細胞で発現させ、活性を確認し、同様の実験を行った。
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