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2016 Fiscal Year Research-status Report

G蛋白活性調節因子による血管形成制御機構の解析

Research Project

Project/Area Number 16K08508
Research InstitutionAichi Medical University

Principal Investigator

佐藤 元彦  愛知医科大学, 医学部, 教授 (40292122)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 林 寿来  愛知医科大学, 医学部, 講師 (30533715)
Project Period (FY) 2016-04-01 – 2019-03-31
Keywords血管新生 / 血管内皮増殖因子受容体
Outline of Annual Research Achievements

内皮細胞のモデルとしてヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を用いて、G蛋白活性調節因子Activator of G-protein Signaling 8 (AGS8)が血管形成を促す血管内皮増殖因子(Vascular endothelial growth factor 、VEGF)シグナルへ与える影響を検討した。HUVECのAGS8発現 をsiRNAによりノックダウンしたところ、AGS8 siRNAはcontrol siRNAに比べAGS8mRNAの発現を13%まで低下させた。HUVECをMatrigel上で培養し、VEGFで刺激して管腔形成をさせた。形成された管腔長を画像解析したところAGS8ノックダウンは管腔形成を対照群の30%まで低下させた。さらに、VEGFによる細胞増殖をMTT解析、細胞遊走能をボイデンチャンバー法に検討したところ、AGS8ノックダウンはそれぞれをcontrol siRNA群に比し33.3%、および36.9%に抑制した。次にVEGFR2受容体の細胞内分布を検討したところ、蛍光免疫染色によりVRGFR2受容体がAGS8ノックダウンにより細胞内に蓄積すること、flow cytometry解析によりAGS8ノックダウン後、細胞膜表面のVRGFR2受容体が減少することが明らかになった。一方、AGS8ノックダウンはwhole cellレベルでのVEGFR2受容体の発現には影響を与えなかった。さらに、western blotにより、VEGFシグナルを検討したところ、AGS8ノックダウンによりVEGFによるVEGFR2、ERK1/2、p38/MAPKのリン酸化が抑制されることが明らかとなった。興味深いことに、AGS8ノックダウンは上皮成長因子シグナルには影響を与えなかった。AGS8siRNAの一部効果は培養脈絡膜血管内皮細胞でも確認することができた。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

平成28年度当初に予定した培養血管内皮細胞を用いて、AGS8が血管新生に与える影響を検討するという計画はおおむね実行することができた。当初の仮説どおり、AGS8は血管新生シグナルに関与することが示された。特に、AGS8は血管内皮増殖因子シグナル特異的に関与する可能性を見いだしたのは今期の成果と考える。HUVEC以外の培養内皮細胞での検討は、やや遅れているが既に検討を開始しており、来期に報告すること予定している。

Strategy for Future Research Activity

1.AGS8がVEGFシグナルを制御することをHUVEC以外の培養内皮細胞で検討する。HUVECで得られた結果が、血管内皮細胞一般に見られる現象か、ヒト臍帯動脈内皮細胞(Human Aortic Endothelial Cells、HUAEC)および脈絡膜血管内皮細胞を対照として検討を行う。
2.VEGF受容体とAGS8の蛋白複合体を確認する:AGS8全長、あるいはGβγ相互作用部位等のAGS8各領域をタグ付蛋白として、VEGF受容体と共にCOS7あるいはHEK293細胞へ発現させ、免疫沈降によりAGS8-VEGF受容体複合体の検出を行う。
3.AGS8-Gβγ複合体形成阻害による血管形成シグナル制御:AGS8はG蛋白活性調節因子として同定され、G蛋白βγサブユニットと会合しシグナルを形成する。AGS8-Gβγ複合体が血管新生に必要なのか、複合体形成を阻害して検討する。申請者はAGS8のGβγ結合領域のアミノ酸配列をもとにAGS8-Gβγの相互作用を阻害するペプチド(AGS8ペプチド)を作製し、細胞内で機能することを示している(Sato M et al. PLoS One 2014:9:e91980)。AGS8シグナルを遮断する合成ペプチドを細胞内に導入し、血管形成阻害作用を検討する。

Causes of Carryover

本年度は研究実績に記載したとおり実験結果を比較的順調に得ることができ、細胞購入および培養に要する費用が軽減した。また、AGS8siRNA合成に要する費用も当初予定より軽減したため次年度使用額が生じた。

Expenditure Plan for Carryover Budget

次年度へ繰り越した助成金は平成29年度分と合わせて、他の内皮細胞の購入と培養に要する費用に充てる予定である。平成29年度に当初から計画されていた助成金は試薬購入の他、研究推進に必要なパートタイム研究補助員の謝金として使用する予定である。

  • Research Products

    (20 results)

All 2018 2017 2016 Other

All Journal Article (9 results) (of which Peer Reviewed: 9 results,  Acknowledgement Compliant: 3 results,  Open Access: 2 results) Presentation (10 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Epac activation inhibits IL-6-induced cardiac myocyte dysfunction2018

    • Author(s)
      Jin Huiling、Fujita Takayuki、Jin Meihua、Kurotani Reiko、Hidaka Yuko、Cai Wenqian、Suita Kenji、Prajapati Rajesh、Liang Chen、Ohnuki Yoshiki、Mototani Yasumasa、Umemura Masanari、Yokoyama Utako、Sato Motohiko、Okumura Satoshi、Ishikawa Yoshihiro
    • Journal Title

      The Journal of Physiological Sciences

      Volume: 68 Pages: 77~87

    • DOI

      10.1007/s12576-016-0509-5

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Effects of bright light exposure during daytime on peripheral clock gene expression in humans.2017

    • Author(s)
      Sato Maki, Wakamura T, Morita T, Okamoto A, Akashi M, Matsui T, Sato Motohiko
    • Journal Title

      Int J Biometeorol.

      Volume: 印刷中 Pages: 印刷中

    • DOI

      10.1007/s00484-016-1294-9

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Adenosine triphosphate is a critical determinant for VEGFR signal during hypoxia.2016

    • Author(s)
      Mamun AA, Hayashi H, Sakima M, Sato Motohiko
    • Journal Title

      Am J Physiol Cell Physiol

      Volume: 311 Pages: C985-C995

    • DOI

      10.1152/ajpcell.00145.2016

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Sevoflurane inhalation accelerates the long-term memory consolidation via small GTPase overexpression in the hippocampus of mise in adolescence.2016

    • Author(s)
      Nakamura E, Kinoshita H, Feng GG, Hayashi H, Satomoto M, Sato Motoiko, Fujiwara Y.
    • Journal Title

      PLoS One.

      Volume: 11 Pages: e0163151

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0163151

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] High oxygen modifies vasodilator effect of cysteine via enhanced oxidative stress and thromboxane production in the rat mesenteric artery.2016

    • Author(s)
      Yasuda Y, Feng GG, Li J, Nakamura E, Hayashi H, Sato Motohiko, Fujiwara Y, Kinoshita H.
    • Journal Title

      Pflugers Arch

      Volume: 468 Pages: 1555-64

    • DOI

      10.1007/s00424-016-1857-y

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Disruption of Epac1 protects the heart from adenylyl cyclase type 5-mediated cardiac dysfunction.2016

    • Author(s)
      Cai W, Fujita T, Hidaka Y, Jin H, Suita K, Liang C, Prajapati R, Umemura M, Yokoyama U, Sato Motohiko, Okumura S, Ishikawa Y.
    • Journal Title

      Biochem Biophys Res Commun

      Volume: 475 Pages: 1-7

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2016.04.123

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Simultaneous hyperthermia-chemotherapy with controlled drug delivery using single-drug nanoparticles.2016

    • Author(s)
      Sato I, Umemura M, Mitsudo K, Fukumura H, Kim JH, Hoshino Y, Nakashima H, Kioi M, Nakakaji R, Sato Motohiko, Fujita T, Yokoyama U, Okumura S, Oshiro H, Eguchi H, Tohnai I, Ishikawa Y.
    • Journal Title

      Sci Rep

      Volume: 6 Pages: 24629

    • DOI

      10.1038/srep24629

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Differences in autonomic neural activity during exercise between the second and third trimester of pregnancy.2016

    • Author(s)
      Nakagaki A, Inami T, Minoura T, Baba R, Iwase S, Sato Motohiko.
    • Journal Title

      J Obstet Gynaecol Res

      Volume: 42 Pages: 951-9

    • DOI

      10.1111/jog.12990

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Water nanodroplets emitted from an air conditioner increased skin moisture levels at the lateral canthus in winter by forming a lipid film with sebum.2016

    • Author(s)
      Ohno H, Nishimura N, Yamada K, Shimizu Y, Nishimura R, Iwase S, Sugenoya J, Sato Motohiko.
    • Journal Title

      Skin Res Technol

      Volume: 22 Pages: 388-90

    • DOI

      10.1111/srt.12262

    • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] シンポジウム38「酸素濃度変化が起点となる心血管生理調節機構」虚血組織における血管新生シグナル抑制.2017

    • Author(s)
      佐藤元彦, マムン アル アブドラ, 林寿来.
    • Organizer
      第94回日本生理学会大会
    • Place of Presentation
      浜松市、アクトシティ浜松
    • Year and Date
      2017-03-28 – 2017-03-30
  • [Presentation] 肥満者における唾液での時計遺伝子発現の季節性変動.2017

    • Author(s)
      佐藤麻紀, 林寿来, 池本辰則, 牛田享宏, 佐藤元彦.
    • Organizer
      第94回日本生理学会大会
    • Place of Presentation
      浜松市、アクトシティ浜松
    • Year and Date
      2017-03-28 – 2017-03-30
  • [Presentation] VEGFシグナル形成におけるアデノシン三リン酸の役割2017

    • Author(s)
      マムン アル アブドラ, 林寿来, 佐喜眞未帆, 佐藤元彦.
    • Organizer
      第94回日本生理学会大会
    • Place of Presentation
      浜松市、アクトシティ浜松
    • Year and Date
      2017-03-28 – 2017-03-30
  • [Presentation] AGS8による脈絡膜血管新生の制御.2017

    • Author(s)
      林寿来, マムン アル アブドラ, 佐喜眞未帆, 武山正行, 雑喉正泰, 矢ケ崎莉菜, 中原努, 佐藤元彦.
    • Organizer
      第94回日本生理学会大会
    • Place of Presentation
      浜松市、アクトシティ浜松
    • Year and Date
      2017-03-28 – 2017-03-30
  • [Presentation] AGS8はVEGFCが誘導するリンパ管新生を制御する.2017

    • Author(s)
      佐喜眞未帆, 林寿来, マムン アル アブドラ, 佐藤元彦
    • Organizer
      第94回日本生理学会大会
    • Place of Presentation
      浜松市、アクトシティ浜松
    • Year and Date
      2017-03-28 – 2017-03-30
  • [Presentation] G蛋白調節因子を標的にした脈絡膜血管新生の抑制.2017

    • Author(s)
      林寿来, Abdullah Al Mamun, 佐喜眞未帆, 武山正行, 雑喉正泰, 矢ヶ崎莉菜, 中原努, 佐藤元彦.
    • Organizer
      第90回日本薬理学会年会
    • Place of Presentation
      長崎市、長崎ブリックホール, 長崎新聞文化ホールアストピア
    • Year and Date
      2017-03-28 – 2017-03-30
  • [Presentation] 低酸素環境下での血管内皮増殖因子シグナル変化.2016

    • Author(s)
      Abdullah Al Mamun, 林寿来, 佐喜眞未帆, 佐藤元彦.
    • Organizer
      第63回中部日本生理学会
    • Place of Presentation
      岡崎市、自然科学研究機構岡崎コンファレンスセンター
    • Year and Date
      2016-11-04 – 2016-11-05
  • [Presentation] G蛋白活性調節因子AGS8はVEGFを介するリンパ管新生を制御する.2016

    • Author(s)
      佐喜眞未帆, 林寿来, Abdullah Al Mamun, 高橋理恵, 佐藤元彦.
    • Organizer
      第63回中部日本生理学会
    • Place of Presentation
      岡崎市、自然科学研究機構岡崎コンファレンスセンター
    • Year and Date
      2016-11-04 – 2016-11-05
  • [Presentation] 脈絡膜血管新生におけるAGS8の機能.2016

    • Author(s)
      林寿来, Abdullah Al Mamun, 佐喜眞未帆, 武山正行, 雑喉正泰, 矢ヶ崎莉菜, 中原努, 佐藤元彦
    • Organizer
      生理学研究所研究会2016:心臓・血管系の包括的な機能統合研究
    • Place of Presentation
      福岡市、九州大学馬出キャンパス
    • Year and Date
      2016-10-24 – 2016-10-25
  • [Presentation] 低酸素による血管内皮増殖因子シグナル制御.2016

    • Author(s)
      Abdullah Al Mamun, 佐藤元彦.
    • Organizer
      第26回日本病態生理学会大会
    • Place of Presentation
      石川県河北郡内灘町、金沢医科大学医学教育棟
    • Year and Date
      2016-08-05 – 2016-08-07
  • [Remarks] 愛知医科大学医学部生理学講座(旧生理学第2)

    • URL

      http://www.aichi-med-u.ac.jp/physio2/index.html

URL: 

Published: 2018-01-16  

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