細胞診による中皮腫診断に関する研究：p16 FISHと免疫染色による腫瘍性の確認

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 16K08678
• Research Institution: Fukuoka University
• Principal Investigator: 鍋島 一樹 福岡大学, 医学部, 教授 (40189189)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 濱崎 慎 福岡大学, 医学部, 准教授 (90412600)
• Project Period (FY): 2016-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: mesothelioma / differential diagnosis / p16 / 9p21 / BAP1 / MTAP / FISH

Outline of Annual Research Achievements

初年度の研究にて、9p21領域遺伝子産物（p14, p15, p16, MTAP)の中で、9p21 FISHで捉えられるホモ欠失と最もよく相関するのはMTAP (methylthioadenosine phosphorylase)遺伝子産物であったので、悪性胸膜中皮腫 vs 反応性中皮過形成との鑑別におけるMTAP免疫組織化学（免染）の有用性について検討した。MTAPとBAP1の免染の組み合わせによっても、BAP1免染と9p21 FISHの組み合わせにはおよばないが、上記鑑別診断における感度は80％を超え、特異度も100％であることから、日常診断に有用であることがわかった。特に、肉腫型中皮腫においては、MTAP免染単独でも感度は80％と高く、BAP1免染との組み合わせによって90％まで上昇する。線維形成性中皮腫と線維性胸膜炎の鑑別に応用可能であり、重要度は高い。また、MTAPとBAP1の免染の組み合わせの細胞診（セルブロック）への応用も行い、同様に90％に近い感度を得ることができた（特異度は100％）。さらに免染の正確な判定に必要な問題点の把握と対策にも取り組んできた。結果は、USCAP, IMIG, 日本肺癌学会にて発表し、Lung Cancer誌およびCancer Cytopathology誌への発表も行った。

Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

当初、9p21領域遺伝子産物とBAP1の免疫染色およびp16 FISHの施行と統計学的解析が、初年度に終了している場合にはその結果に従い、未完了の場合にはその継続をまず行って、解析結果を得る、と予定していたが、順調で、すでに得られた結果に従って、組織において上皮型および肉腫型中皮腫のそれぞれにおける良性反応性中皮過形成（あるいは線維性胸膜炎）との鑑別における感度・特異度も得られ、日常診療に極めて有用であることを示すことができた。9p21 FISHの代用の可能性があるということで海外の研究者からも注目されたが、今年のUSCAP, IMIGではすでに追試による結果も提示されて、極めてよく再現されることが確認された。中皮腫研究者のupdateにもすでに鑑別診断とツールとして、MTAP免染が記載されるようになった。我々はさらに細胞診への応用にも取り組んで、成果を出しつつある。また、その応用における問題点と解決に関しても重要な提言ができるように取り組んでいる。

Strategy for Future Research Activity

当初の予定は、「選定された組み合わせでの中皮腫vs反応性中皮の鑑別が、細胞診標本においても可能で、p16 FISH単独よりも優れている場合には、その普及化に関して、研究協力者の施設での再現研究に取り組む。」というものであった。実際には、MTAP免染にはp16 FISHの代用としての意義が見出され、BAP1+MTAPの免染同士の組み合わせでも、BAP1+p16 FISHの組み合わせに近い感度を出せることがわかった。さらに細胞診（セルブロック）への応用も可能である。従って、研究協力者の施設におけるMTAP免染の普及に努めたい。しかし、この免染の解釈にあたっては、（１）中皮腫細胞が弧在散在性に存在する場合には、腫瘍細胞の同定が困難で、従ってMTAP発現の有無の判定も困難となる、（２）核のみ、細胞質のみにおけるMTAP発現の欠失が認められる場合があり、その際にはどのようにするべきか、判断の困難な場合がある、（３）内在性陽性コントロール細胞がうまく染まらないあるいはまだらに染まるという問題も一部の症例では認められる、という問題点に気づいており、現在その解決策について検討中である。日常診療において大変重要な点であるので、この検討結果も含めて、MTAP免染の普及にあたりたい。

Research Products

• [Journal Article] A combination of MTAP and BAP1 immunohistochemistry in pleural effusion cytology for the diagnosis of mesothelioma. (2018)
  • Author(s): Kinoshita Y, Hida T, Hamasaki M, Matsumoto S, Sato A, Tsujimura T, Kawahara K, Hiroshima K, Oda Y, Nabeshima K
  • Journal Title: Cancer Cytopathol Volume: 126 Pages: 54-63
  • DOI: 10.1002/cncy.21928
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Immunohistochemical detection of MTAP and BAP1 protein loss for mesothelioma diagnosis: Comparison with 9p21 FISH and BAP1 immunohistochemistry. (2017)
  • Author(s): Hida T, Hamasaki M, Matsumoto S, Sato A, Tsujimura T, Kawahara K, Iwasaki A, Okamoto T, Oda Y, Honda H, Nabeshima K.
  • Journal Title: Lung Cancer Volume: 104 Pages: 98-105
  • DOI: 10.1016/j.lungcan.2016.12.017.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Usefulness of p16/CDKN2A fluorescence in situ hybridization and BAP1 immunohistochemistry for the diagnosis of biphasic mesothelioma. (2017)
  • Author(s): Wu D, Hiroshima K, Yusa T, Ozaki D, Koh E, Sekine Y, Matsumoto S, Nabeshima K, Sato A, Tsujimura T, Yamakawa H, Tada Y, Shimada H, Tagawa M.
  • Journal Title: Ann Diagn Pathol Volume: 26 Pages: 31-37
  • DOI: 10.1016/j.anndiagpath.2016.10.010.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The differential diagnosis between pleural sarcomatoid mesothelioma and spindle cell/pleomorphic (sarcomatoid) carcinomas of the lung: evidence-based guidelines from the International Mesothelioma Panel and the MESOPATH National Reference Center. (2017)
  • Author(s): Marchevsky AM, LeStang N, Hiroshima K, Pelosi G, Attanoos R, Churg A, Chirieac L, Dacic S, Husain A, Khoor A, Klebe S, Lantuejoul S, Roggli V, Vignaud JM, Weynard B, Sauter J, Henderson D, Nabeshima K, Galateau-Salle F.
  • Journal Title: Hum Pathol Volume: 67 Pages: 160-168
  • DOI: 10.1016/j.humpath.2017.07.015.
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Diagnostic application of BAP1 immunohistochemistry to differentiate pleural mesothelioma from metastatic pleural tumours. (2017)
  • Author(s): Yoshimura M, Kinoshita Y, Hamasaki M, Matsumoto S, Hida T, Oda Y, Nabeshima K.
  • Journal Title: Histopathology Volume: 71 Pages: 1011-1014
  • DOI: 10.1111/his.13321.
• [Presentation] Nuclear Grade, Necrosis and Solid Growth Pattern Predict Survival in Epithelioid Malignant Mesothelioma: An International, Multi-Institutional Study. (2017)
  • Author(s): Lauren E Rosen, Vijayalakshmi Ananthanarayanan, Alexander Gallan, Melissa Yuwono Tjota, Richard Attanoos, Fouad Alchami, Luka Brcic, Kelly Butnor, Kenzo Hiroshima, Astero Klampatsa, Leslie Litzky, Alberto M. Marchevsky, Filomena Medeiros, Angeles Montero, David Moore, Kazuki Nabeshima et al.
  • Organizer: 106th Annual Meeting of United States & Canadian Academy of Pathology
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] BAP1 immunohistochemistry differentiates pleural mesothelioma not only from reactive mesothelial hyperplasia but also from metastatic pleural tumors. (2017)
  • Author(s): Masayo Yoshimura, Yoshiaki Kinoshita, Makoto Hamasaki, Shinji Matsumoto, Tomoyuki Hida, Yoshinao Oda, and Kazuki Nabeshima.
  • Organizer: 106th Annual Meeting of United States & Canadian Academy of Pathology
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] A combination of MTAP and BAP1 immunohistochemistry is useful for differentiating malignant and benign mesothelial proliferatons in tissue and cytological specimens. (2017)
  • Author(s): Yoshiaki Kinoshita, Tomoyuki Hida, Makoto Hamasaki, Shinji Matsumoto, Tohru Tsujimura, Kunimitsu Kawahara, Kenzo Hiroshima, Yoshinao Oda, and Kazuki Nabeshima.
  • Organizer: 106th Annual Meeting of United States & Canadian Academy of Pathology
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] An autopsy case of sarcomatoid mesothelioma. (2017)
  • Author(s): Yohei Ogawa, Mikiko Aoki, Yasuhito Mihashi, Makoto Hamasaki, Tomoya Sasaki, Kentaro Watanabe, Morishige Takeshita, Kazuki Nabeshima.
  • Organizer: 第106回日本病理学会総会
• [Presentation] The effects of formalin fixing conditions on fluorescence in situ hybridization in cell block of effusion cytology. (2017)
  • Author(s): Shinji Matsumoto, Yuko Ouchi, Katsumi Kobata, Makoto Hamasaki, Kazuki Nabeshima.
  • Organizer: 第58回日本臨床細胞学会
• [Presentation] Analysis of p16 deletion and loss of BAP1 in peritoneal mesotheliomas in Japan and in China. (2017)
  • Author(s): Kenzo Hiroshima, Di Wu, Zhibin Gao, Kazuki Nabeshima, Tohru Tsujimura.
  • Organizer: 2017 Pulmonary Pathology Society 10th Biennial Meeting.
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 悪性胸膜中皮腫と良性中皮過形成の鑑別におけるMTAPIHC及びBAP1IHCの有用性. (2017)
  • Author(s): 木下 義晃、樋田 知之、濱崎慎、松本慎二、辻村亨, 佐藤鮎子, 河原邦光, 廣島健三, 小田義直, 鍋島一樹.
  • Organizer: 第58回日本肺癌学会学術集会
• [Presentation] 中皮腫の早期診断に役立つp16 FISHとBAP1, MTAP免疫染色. (2017)
  • Author(s): 鍋島一樹、木下義晃、松本慎二、樋田知之,佐藤鮎子, 辻村亨, 河原邦光, 廣島健三, 亀井敏昭, 小田義直.
  • Organizer: 第58回日本臨床細胞学会総会 シンポジウム３.
• [Presentation] 中皮腫の組織/細胞診診断 update-遺伝子変異に基づく免疫染色・FISHの応用. (2017)
  • Author(s): 鍋島一樹.
  • Organizer: 第34回日本呼吸器外科学会総会 教育講演
• [Presentation] 中皮腫の細胞診update. (2017)
  • Author(s): 鍋島一樹、木下義晃、松本慎二、樋田知之, 佐藤鮎子, 辻村亨, 河原邦光, 廣島健三, 亀井敏昭, 小田義直.
  • Organizer: 第106回日本病理学会総会コンパニオンミーティング 中皮腫診断の最前線
• [Presentation] 中皮腫の遺伝子変異と診断への応用. (2017)
  • Author(s): 鍋島一樹.
  • Organizer: 第11回九州肺癌胸膜中皮腫研究会・特別講演.
• [Book] 悪性胸膜中皮腫細胞診断の手引き. (2017)
  • Author(s): 日本肺癌学会細胞診判定基準改訂委員会・中皮腫細胞診評価ワーキンググループ：佐藤之俊，廣島健三，木浦勝行，薄田勝男，大林千穂，河原邦光，桜田晃，羽場礼次，三浦弘之，三窪将史，吉澤明彦, 柿沼廣邦，竹中明美，三宅真司, 亀井敏昭，秋田弘俊，岡輝明，河合俊明，児玉哲郎，武島幸男，辻村亨，鍋島一樹，畠榮，他.
  • Total Pages: https://www.haigan.gr.jp/uploads/photos/1539.pdf
  • Publisher: 日本肺癌学会
• [Book] 平成28年度石綿関連疾患に係る医学的所見の解析調査業務（FISH法等を用いた中皮腫診断法の開発に関する調査編）報告書 (2017)
  • Author(s): 吉村雅代、鍋島一樹、木下義晃、松本慎二、濵﨑慎、樋田知之.
  • Total Pages: 63
  • Publisher: 環境省
• [Book] 平成28年度石綿関連疾患に係る医学的所見の解析調査業務（FISH法等を用いた中皮腫診断法の開発に関する調査編）報告書 (2017)
  • Author(s): 鍋島一樹、木下義晃、樋田知之、松本慎二、濵﨑慎、佐藤鮎子、辻村亨、廣島健三.
  • Total Pages: 63
  • Publisher: 環境省