2016 Fiscal Year Research-status Report
膜輸送関連蛋白質alpha-taxilinの消化管発癌における役割
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16K08695
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| Research Institution | Dokkyo Medical University |
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Principal Investigator |
今井 康雄 獨協医科大学, 医学部, 教授 (10342651)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | alpha-taxilin / 大腸癌 / 免疫染色 / 生物学的悪性度 / 予後 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Alpha-taxilinは細胞内膜輸送に関連する蛋白質であるが，その生理機能については未だ多くが不明である．また一部の悪性腫瘍では発現が亢進することが知られており，膠芽腫，肝細胞癌や腎細胞癌での発現亢進と悪性度，予後との相関が報告され，腫瘍マーカーあるいは予後マーカーとしての可能性が示唆されている．一方，正常の消化管上皮ではalpha-taxilinの発現が増殖帯に一致して見られることから，消化管癌でも細胞増殖能や悪性度，転移と予後不良との関連が予想されるものの，未だ報告がなされていない．本研究では，消化管癌についてalpha-taxilinの発現と生物学的悪性度の関連を明らかにすることを目的として研究を開始した．
初年度は，所属期間である獨協医科大学病院と国際医療福祉大学塩谷病院での研究計画の生命倫理委員会へ申請を行い研究計画が受理された．次に抗alpha-taxilin抗体の免疫染色の条件を決定した．抗alpha-taxilin抗体は，獨協医科大学細胞生物学講座で開発されたポリクローナル抗体であり，ホルマリン固定パラフィン包埋切片での免疫染色条件が決定されていなかった．そこで外科的に切除された大腸癌検体を用いて抗原性回復方法と抗体濃度を決定し，さらに内因性コントロールを比較対象にした発現レベルの決定を行った．
次にalpha-taxilinの発現と増殖能の関連を見るための腫瘍サンプルの選定と判定法の決定を行った．増殖能はKi-67の陽性細胞数の割合（MIb-1 index）として評価したが，陰窩全体としてMib-1 indexとalpha-taxilin陽性の程度を評価すると，増殖との関連がmaskされてしまうため陰窩を上中下の３等分し，各々についてMib-1 indexとalpha-taxilin発現レベルを評価した．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
抗alpha-taxilin抗体は，獨協医科大学細胞生物学講座白瀧ラボで開発されたポリクローナル抗体であり，ホルマリン固定パラフィン包埋切片での免疫染色条件が決定されていなかった．そこで獨協医科大学病院で外科的に切除された大腸癌検体を用いて抗原性回復方法（マイクロウェーブ400W, 95℃, 40分）と抗体濃度（1: 1000）を決定し，さらに内因性コントロールを比較対象にした発現レベルの決定（level 0, 発現なし；level 1, level 1と2の間；level 2, リンパ濾胞胚中心細胞あるいは神経節細胞；level 3, 陰窩底部幹細胞，免疫芽球，リンパ濾胞樹状細胞）を行った．
結腸粘膜では増殖帯は陰窩底部に局在するが，腺腫になると増殖帯は陰窩表層部分に移行する．また癌に進行すると増殖帯は表層から再び下方に下がってくる（大腸発癌のトップダウンセオリー）．増殖能はKi-67の陽性細胞数の割合（MIb-1 index）として評価したが，陰窩全体としてMib-1 indexとalpha-taxilin陽性の程度を評価すると，増殖との関連がmaskされてしまうため陰窩を上中下の３等分し，各々についてMib-1 indexとalpha-taxilin発現レベルを評価した．
以上のように実際の症例解析に入る前の条件設定はほぼ完了した．
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| Strategy for Future Research Activity |
主に内視鏡的切除材料の大腸腺腫内癌を用いて，正常粘膜から腺腫，腺癌へとプログレッションしていく中でMib-1 indexとalpha-taxilin発現レベルの推移を検討する．
次に大腸進行癌でのalpha-taxilin発現レベルと臨床病理学的パラメーター，および無再発生存期間，全生存期間との関連を解析する．
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| Causes of Carryover |
次年度の研究計画の準備を進めていたが，年度末までに間に合わなかったため．
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
標本作成と免疫染色の試薬購入を行う．
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